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汕头大学海洋科学接受调剂
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huangrui5036

金虫 (小有名气)

[求助] 里氏木霉在10L发酵罐发酵检测不到酶活

最近在做发酵罐的实验,但发酵罐上做却检测不到酶活。我做的是里氏木霉产木聚糖酶,是一种丝状真菌。培养基的配方已经在摇瓶上优化好,并且在摇瓶里的酶活已经非常可观。在摇瓶里基本上发酵24h就能检测到酶活,48h后酶活就已经很明显了,最大酶活出现在第5天左右。
     但悲剧的是我按照摇瓶的配方放大到30L发酵罐上(装液量10L)到现在已经50多小时了却几乎检测不到酶活,悲催的是这已经是第二罐了,两罐都是这样一直检测不到酶活,但菌体生长却很丰富。
      与摇瓶不同的是,在罐上做的时候我加入了消泡剂GPE(添加量5ml/L),不知道是不是消泡剂的影响呢?
      还有一个很重要的东西就是溶氧,在种子液接入罐中后几小时后溶氧迅速下降至0.2%左右,然后一直维持这个数值,到现在已经50多个小时,溶氧似乎有回升迹象(已经到1.0%左右),我的通风量是10L/min,是不是这个通风量小了的缘故。

     望各位做发酵的高手支招啊,小弟在线等,感激不尽啊!
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biolio2009

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助! 2013-01-17 21:36:32
通气量增大,降低搅拌速度,如果发酵气泡不是非常严重,一致影响发酵那就最好别加消泡剂,或者小量加分批加,看看有没有改善。不应该发生这样的事情啊 。
2楼2013-01-17 08:26:04
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war3one

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励应助 2013-01-19 21:16:01
可能培养基中含有大量固体不容物,罐子不能把它搅拌均匀,菌体都在液体中生长啦

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
8楼2013-01-19 18:41:55
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普通回帖

lihao1988903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励应助! 2013-01-17 21:36:44
huangrui5036: 金币+50, ★★★很有帮助, 问题基本上已经解决了 2013-03-14 19:05:46
看来是你控制条件不好,调节通气和转速,让溶氧保持一定水平,不要生长太快或者太慢。还有你的消泡剂量怎么那么多啊,我们一般30L才加5ml,消泡剂对菌体生长是有毒性的。而且你发酵罐肯定比摇瓶培养量大了,可能得多培养会儿才会有酶活。要多试几次,摸一下发酵罐的培养条件。
3楼2013-01-17 09:23:46
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huangrui5036

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lihao1988903 at 2013-01-17 09:23:46
看来是你控制条件不好,调节通气和转速,让溶氧保持一定水平,不要生长太快或者太慢。还有你的消泡剂量怎么那么多啊,我们一般30L才加5ml,消泡剂对菌体生长是有毒性的。而且你发酵罐肯定比摇瓶培养量大了,可能得多 ...

是将通气量和转速同时加大吗?通气量调到25L/min怎么样?转速我不敢调大啊,我怕菌体承受不了那么大的剪切力。您怎么看?
一起学习,一起进步
4楼2013-01-17 14:59:19
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huangrui5036

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lihao1988903 at 2013-01-17 09:23:46
看来是你控制条件不好,调节通气和转速,让溶氧保持一定水平,不要生长太快或者太慢。还有你的消泡剂量怎么那么多啊,我们一般30L才加5ml,消泡剂对菌体生长是有毒性的。而且你发酵罐肯定比摇瓶培养量大了,可能得多 ...

不好意思,我写错了,消泡剂的添加量是0.5mL/L,这个添加量算多吗?到今天为止已经发酵80多小时了,还是没检测到酶活。
    我把通风量从10L/min加到20L/min,溶氧可以维持在45%~50%之间,不知道到明天早上会不会跌零。
一起学习,一起进步
5楼2013-01-17 20:32:08
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huangrui5036

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biolio2009 at 2013-01-17 08:26:04
通气量增大,降低搅拌速度,如果发酵气泡不是非常严重,一致影响发酵那就最好别加消泡剂,或者小量加分批加,看看有没有改善。不应该发生这样的事情啊 。

不好意思,我写错了,消泡剂的添加量是0.5mL/L,这个添加量算多吗?到今天为止已经发酵80多小时了,还是没检测到酶活。
    我把通风量从10L/min加到20L/min,溶氧可以维持在45%~50%之间,不知道到明天早上会不会跌零。
一起学习,一起进步
6楼2013-01-17 20:32:20
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博ai

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+2, good 2013-01-19 21:15:54
溶氧都掉到0.2%的,肯定会严重影响产酶的,试着搅拌转数提高吧,通气量10L/min够了。30L的发酵罐,对于霉菌,打到500rpm都没问题的,而且较高数的搅拌,霉菌会形成菌球,可能会对产酶有帮助。另外,你从初始就要保证足够的溶氧,几十小时以后再调节估计没什么效果,菌体在低溶氧状态下,相关合成酶系可能发生不可逆的变化。
7楼2013-01-18 16:22:48
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huangrui5036

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 博ai at 2013-01-18 16:22:48
溶氧都掉到0.2%的,肯定会严重影响产酶的,试着搅拌转数提高吧,通气量10L/min够了。30L的发酵罐,对于霉菌,打到500rpm都没问题的,而且较高数的搅拌,霉菌会形成菌球,可能会对产酶有帮助。另外,你从初始就要保证 ...

第4天的时候我把通气量调到20L/min,转速没有变,之后溶氧维持在50%左右,维持了几小时后便开始上升,然后开始检测到酶活了,而且酶活上升得还比较快,搅拌我不敢开大了,因为我在做摇瓶的时候发现这个菌种对剪切力很敏感。再来一罐试试吧,呵呵,感谢赐教。
一起学习,一起进步
9楼2013-01-21 19:33:13
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

感觉搅拌速度有点高了。
蓝精灵
10楼2013-01-21 20:11:39
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