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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 为什么我算出来的酶活那么小呢，都不到1呢
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非常龙齐齐

银虫 (小有名气)

[求助] 为什么我算出来的酶活那么小呢，都不到1呢 已有2人参与

在一定条件下，每分钟释放出1μmol对硝基苯酚所消耗的酶量定义为1个脂肪酶活力单位(U)。
按下式计算酶活:
X=cV/（tm）        
式中:
X为脂肪酶活力，U•mg-1；c为对硝基苯酚浓度，μmol•mL-1；V为酸碱调节后的反应液终体积，mL；m为酶的质量，mg；t为作用时间，min。
       我根据上面公式计算出来的脂肪酶活力很小，10的-4次方左右的，有哪位知道是哪里出了问题呢？我用的是PNPP法测酶活性，对硝基苯酚浓度C根据标准曲线算出来的，底物与酶液反应后，用碳酸钠溶液萃取，最后体积是10ml，反应时间10min，酶的用量是100微升*15mg/ml=1.5mg
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1楼 2013-03-19 11:06:58
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幽幽深谷竹

金虫 (著名写手)

骨子里是文科男的理科男

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-03-21 08:10:15
非常龙齐齐: 金币+1 2013-04-01 15:55:56
我做过淀粉酶、蛋白酶酶活测定，都还不错。我用的是试剂盒，最重要的一点就是要确定最适底物浓度，不知道楼主是否做过预实验来确定一下。
还有，从你的公式来看，我怎么觉得那么别扭呢？请问你用的是比色法吗？或者是滴定法？
这个很灵敏的，低也很正常。还有就是楼主是否注意一下单位有无错误。
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非常龙齐齐
我就是我IamwhatIam
8楼2013-03-20 09:41:30
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幽幽深谷竹

金虫 (著名写手)

骨子里是文科男的理科男
引用回帖:
9楼: Originally posted by 非常龙齐齐 at 2013-03-20 10:49:07
做过最适底物浓度的实验，确定了最适浓度了。我用的比色法。单位我看了好多遍了，没错误啊...

比色法应该有吸光度的，你的公式没反映出来呢
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我就是我IamwhatIam
10楼2013-03-20 11:44:16
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幽幽深谷竹

金虫 (著名写手)

骨子里是文科男的理科男

【答案】应助回帖

★ ★
非常龙齐齐: 金币+2 2013-04-02 16:52:10
引用回帖:
13楼: Originally posted by 非常龙齐齐 at 2013-04-01 15:57:35
我可不可以把公式中酶的用量单位定义成g而不是mg呢？...

要看你测的是什么，脂肪酶的活力一般都不高。比如植食性昆虫，这个酶肯定不会高，都是1以下。酶活力单位可以自己定义的，换成G也可以的。
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非常龙齐齐
我就是我IamwhatIam
14楼2013-04-02 10:27:05
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幽幽深谷竹

金虫 (著名写手)

骨子里是文科男的理科男

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by 2011jonathan at 2013-12-07 11:26:16
您好，打扰您了，我最近在测微生物发酵液上清脂肪酶的酶活，用pNPP分光光度法测脂肪酶酶活，以及制作pNP标准曲线，发现测出的OD值普遍偏低，普遍集中在0.1~0.2，换算成pNP浓度(uM)后数值基本在10以内，根据其他文献 ...

知道了吸光度以后，根据做出的标准曲线，可以找出反应前后的产物浓度，接着就能算出酶活了。
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我就是我IamwhatIam
17楼2013-12-08 17:47:22
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幽幽深谷竹

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引用回帖:
18楼: Originally posted by 2011jonathan at 2013-12-10 19:51:16
您好，我根据标曲算出反应后产物pNP的浓度后该用什么公式算酶活呢，我看了好多篇文献好像求酶活的公式都不太一样，有的公式还带有摩尔消光系数，有的公式还用不着产物浓度，我也搞不清用哪个，能麻烦您再告诉我求酶 ...

这个公式确实是不同，但是原理都一样，看你怎么定义一个酶活力单位了。如果你的定义是单位时间单位体积产生的产物量，那就根据这个定义去算啊，生物化学里有的，你可以参照酶活拿一章节。
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我就是我IamwhatIam
19楼2013-12-10 21:21:24
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