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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 为什么我算出来的酶活那么小呢，都不到1呢
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非常龙齐齐

银虫 (小有名气)

[求助] 为什么我算出来的酶活那么小呢，都不到1呢 已有2人参与

在一定条件下，每分钟释放出1μmol对硝基苯酚所消耗的酶量定义为1个脂肪酶活力单位(U)。
按下式计算酶活:
X=cV/（tm）        
式中:
X为脂肪酶活力，U•mg-1；c为对硝基苯酚浓度，μmol•mL-1；V为酸碱调节后的反应液终体积，mL；m为酶的质量，mg；t为作用时间，min。
       我根据上面公式计算出来的脂肪酶活力很小，10的-4次方左右的，有哪位知道是哪里出了问题呢？我用的是PNPP法测酶活性，对硝基苯酚浓度C根据标准曲线算出来的，底物与酶液反应后，用碳酸钠溶液萃取，最后体积是10ml，反应时间10min，酶的用量是100微升*15mg/ml=1.5mg
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1楼 2013-03-19 11:06:58
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

幽幽深谷竹

金虫 (著名写手)

骨子里是文科男的理科男

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-03-21 08:10:15
非常龙齐齐: 金币+1 2013-04-01 15:55:56
我做过淀粉酶、蛋白酶酶活测定，都还不错。我用的是试剂盒，最重要的一点就是要确定最适底物浓度，不知道楼主是否做过预实验来确定一下。
还有，从你的公式来看，我怎么觉得那么别扭呢？请问你用的是比色法吗？或者是滴定法？
这个很灵敏的，低也很正常。还有就是楼主是否注意一下单位有无错误。
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非常龙齐齐
我就是我IamwhatIam
8楼2013-03-20 09:41:30
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幽幽深谷竹

金虫 (著名写手)

骨子里是文科男的理科男

【答案】应助回帖

★ ★
非常龙齐齐: 金币+2 2013-04-02 16:52:10
引用回帖:
13楼: Originally posted by 非常龙齐齐 at 2013-04-01 15:57:35
我可不可以把公式中酶的用量单位定义成g而不是mg呢？...

要看你测的是什么，脂肪酶的活力一般都不高。比如植食性昆虫，这个酶肯定不会高，都是1以下。酶活力单位可以自己定义的，换成G也可以的。
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非常龙齐齐
我就是我IamwhatIam
14楼2013-04-02 10:27:05
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weebug

版主 (著名写手)
★
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-03-21 08:10:30
有测纯度吗？
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天蓝蓝兮日头晒
2楼2013-03-19 13:03:40
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weebug

版主 (著名写手)
有测纯度吗？
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天蓝蓝兮日头晒
3楼2013-03-19 13:05:18
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非常龙齐齐

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by weebug at 2013-03-19 13:05:18
有测纯度吗？

什么纯度啊？我的酶是自己用酶粉配的
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4楼2013-03-19 13:53:28
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weebug

版主 (著名写手)
喔，有没优化的温度，底物浓度，酶浓度呢？
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天蓝蓝兮日头晒
5楼2013-03-19 17:04:53
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非常龙齐齐

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by weebug at 2013-03-19 17:04:53
喔，有没优化的温度，底物浓度，酶浓度呢？

35℃，酶浓度15mg/ml，底物浓度1.8微摩尔/ml
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6楼2013-03-19 17:09:22
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weebug

版主 (著名写手)
从文献，查了酶的极佳状态吗？
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天蓝蓝兮日头晒
7楼2013-03-19 21:12:01
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非常龙齐齐

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 幽幽深谷竹 at 2013-03-20 09:41:30
我做过淀粉酶、蛋白酶酶活测定，都还不错。我用的是试剂盒，最重要的一点就是要确定最适底物浓度，不知道楼主是否做过预实验来确定一下。
还有，从你的公式来看，我怎么觉得那么别扭呢？请问你用的是比色法吗？或者 ...

做过最适底物浓度的实验，确定了最适浓度了。我用的比色法。单位我看了好多遍了，没错误啊
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9楼2013-03-20 10:49:07
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幽幽深谷竹

金虫 (著名写手)

骨子里是文科男的理科男
引用回帖:
9楼: Originally posted by 非常龙齐齐 at 2013-03-20 10:49:07
做过最适底物浓度的实验，确定了最适浓度了。我用的比色法。单位我看了好多遍了，没错误啊...

比色法应该有吸光度的，你的公式没反映出来呢
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我就是我IamwhatIam
10楼2013-03-20 11:44:16
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