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SDS-PAGE的问题请教,大家帮帮忙啊!求高手啊!
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我跑过好多次蛋白电泳,但是都不太理想,总是会遇到各种突发状况,例如分离胶和浓缩胶不凝(10%AP是现配的,12.5mL分离胶中加40微升,TEMED10微升;5.5mL体系浓缩胶中AP和TEMED各加10微升),后来我加大了TEMED的量,胶能成形了; 但最近又碰到问题了,我用伯乐的电泳仪15mA恒流跑浓缩胶(两块胶),大概45min还算正常(稍微久了点),30mA跑分离胶40分钟溴酚蓝就跑出了(以前要一个多小时),但是染色发现我的蛋白样品才跑到一半还没有完全分开,Marker也集中在前半段,不知道是什么原因。 难道是溴酚蓝出问题了,怎么比我的样品快那么多,还是说我的分离胶有问题?以前从来没有出现过这种情况。 另外还想请教一下,电流和胶的块数有关系吗?4块胶电流需要翻倍吗? |
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