应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE的问题请教，大家帮帮忙啊！求高手啊！
51/1返回列表
查看: 1715  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ruililian09

银虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE的问题请教，大家帮帮忙啊！求高手啊！

我跑过好多次蛋白电泳，但是都不太理想，总是会遇到各种突发状况，例如分离胶和浓缩胶不凝(10%AP是现配的，12.5mL分离胶中加40微升，TEMED10微升；5.5mL体系浓缩胶中AP和TEMED各加10微升)，后来我加大了TEMED的量，胶能成形了；
但最近又碰到问题了，我用伯乐的电泳仪15mA恒流跑浓缩胶(两块胶)，大概45min还算正常(稍微久了点)，30mA跑分离胶40分钟溴酚蓝就跑出了(以前要一个多小时)，但是染色发现我的蛋白样品才跑到一半还没有完全分开，Marker也集中在前半段，不知道是什么原因。
难道是溴酚蓝出问题了，怎么比我的样品快那么多，还是说我的分离胶有问题？以前从来没有出现过这种情况。
另外还想请教一下，电流和胶的块数有关系吗？4块胶电流需要翻倍吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-16 19:43:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ruililian09

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 王文钊- at 2013-03-17 14:31:59
额，我们跑蛋白胶的时候，电压一般是先80，再150，要不你试试变变电压？还有，如果试剂配的时间久了 ，就都换换吧~

试剂是刚配的，每次电泳都有问题，真是纠结死了
赞一下 回复此楼
6楼2013-03-17 15:09:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉是你的分离胶的问题。测下配分离胶的tris pH。此外还有可能是丙烯酰胺的问题，溶液是自己配的吗？胶不好凝和不正常带型有可能是丙烯酰胺与甲叉丙烯酰胺的比例不对。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-03-17 01:06:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alicelchf

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
电压呢？
你的配方是分子克隆的吗？
换下别人用过的试剂，以前我们遇到过假试剂
赞一下(1人) 回复此楼
修身、齐家、治国、平天下
3楼2013-03-17 08:12:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shsDerek

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉你的TEMED有问题，同时配胶时有可能没有充分混匀，电泳液加的够吗
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-03-17 10:19:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭