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hubei989木虫 (正式写手)
酵父菌
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[求助]
引物特异性验证
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最近准备做荧光定量PCR。已经设计了引物，想请问下怎么验证引物的特异性哇？ 用该引物进行PCR，然后对其产物进行测序比对可不可以呢？ 万分感谢哇~ |
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eagles123
金虫 (正式写手)
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2楼2013-03-13 18:55:08
soarrow
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-03-14 15:21:36
hubei989: 金币+5, ★★★很有帮助, 现在正在做的就是你说的第一条，在做克隆测序。还有个问题，如果我只做理论验证不做实验验证，会不会不严谨啊？（样比较多，许多都是未知菌，不好选取同源性相近的菌）） 2013-03-14 15:23:42
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hubei989: 金币+5, ★★★很有帮助, 现在正在做的就是你说的第一条，在做克隆测序。还有个问题，如果我只做理论验证不做实验验证，会不会不严谨啊？（样比较多，许多都是未知菌，不好选取同源性相近的菌）） 2013-03-14 15:23:42
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1. 可以在NCBI上面进行Blast，看看有没有目的基因以外的高同源性序列，这是理论验证； 2. 实验验证就是拿引物去做特异性验证---拿检测目标的核酸以及与目标同源性相近的其它核酸进行实验验证。 补充楼上的，如果对产物进行测序验证---Realtime PCR产物一般都比较小，100bp左右，PCR产物基本没法直接送公司回收测序，这个得做克隆测序。 |
3楼2013-03-14 12:52:36