| 查看: 2760 | 回复: 22 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
从头设计引物克隆全长基因
|
||
| 我的序列是未知的，我先做了保守区克隆+3'race+5'race，然后将他们拼接起来，去掉属于质粒和RACE试剂盒的区段，得到拼接序列。我现在想从头设计引物来克隆这个序列。验证一下拼接结果。5'端引物打分还行，3'端结尾打分都比较低。并且还有个POLY A尾十几个A。有这方面经验的虫友指点我下，该怎么做呢。谢谢。 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有142人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于引物设计的问题
已经有7人回复
- 如何设计引物扩增片段？做克隆的
已经有11人回复
- 简并引物克隆中的一些问题
已经有8人回复
- 点突变引物设计的问题
已经有11人回复
- 问问pet-28a克隆构建引物的问题
已经有12人回复
- 求助-基因克隆及引物设计的问题
已经有6人回复
- 如何克隆一个在小鼠、大鼠中序列已知，但在人未知的基因？
已经有11人回复
- 1500bp全长的序列，设计引物时一般期望产物长度为多长呢？
已经有4人回复
- 克隆大片段的序列如何设计引物
已经有4人回复
- BL21(DE3)表达脂肪酶重组质粒，将菌体颜色偏白是是怎么回事
已经有17人回复
- DNA复制时的引物
已经有5人回复
- 【求助/交流】分子克隆后M13引物PCR扩增
已经有32人回复
- 【求助/交流】同源克隆设计的引物Tm值过低怎么办
已经有12人回复
- 【求助/交流】加急~~~求助：关于基因克隆与表达引物设计的问题！希望高人指点！
已经有3人回复
- 【求助/交流】基因克隆设计引物
已经有7人回复
- 【求助】求教基因克隆中的引物设计问题【有效期至2010年11月18日】
已经有6人回复
- 怎么扩不出来
已经有7人回复
- 克隆基因全长引物设计问题
已经有32人回复
5楼2013-03-08 09:04:01
niil
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 35 (小学生)
- 金币: 6673.5
- 红花: 3
- 帖子: 835
- 在线: 233.2小时
- 虫号: 876426
- 注册: 2009-10-18
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
2楼2013-03-07 10:50:05
3楼2013-03-07 11:40:05
niil
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 35 (小学生)
- 金币: 6673.5
- 红花: 3
- 帖子: 835
- 在线: 233.2小时
- 虫号: 876426
- 注册: 2009-10-18
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
fengyunqb: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-03-08 09:18:27
fengyunqb: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-04-22 16:24:30
fengyunqb: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-03-08 09:18:27
fengyunqb: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-04-22 16:24:30
|
那这样的话，在ORF两端设计引物，就是扩起始密码和终止密码之间的片段就行。 引物的位置不用严格限定位于这两个位点，能在ORF外侧设计引物最好，要是在ORF内侧设计引物，与起始密码和终止密码差个10-20bp没有问题，引物稍微长一点，把这个片段克隆出来之后，再进行表达载体构建，这时候把缺失的碱基通过引物设计的方法补上在以克隆出来的片段为模板获得完整的ORF。 引物设计软件的得分虽然是衡量标准，但是得分低并不是意味着这个片段扩不出来。尤其是定点设计引物的时候，有矛盾也只能退而求次了。 |
4楼2013-03-07 12:02:45
