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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白纯化的问题
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chinalfx

银虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白纯化的问题 已有5人参与

我的过分子筛蛋白纯化几个小时就产生很多的絮状沉淀，蛋白怎么就没了呢？絮状的沉淀是蛋白吗？
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菲律宾啊菲律宾
1楼 2013-03-04 22:07:00
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jiangyhai

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
SDS-PAGE鉴定下就知道了。
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静心做事。
2楼2013-03-05 08:20:45
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
分子筛之前就沉淀了还是分子筛之后放置了几个小时沉淀？照理说分子筛之后蛋白浓度不大，不太容易沉淀呀。絮状的东西是不是蛋白不好说，我们以前碰到过，透析的时候出现絮状的，跑胶发现那根本不是蛋白，推测是脂类之类的东西。因此，你可以离心一下，检查上清液和沉淀里面哪里有你的蛋白。
再说了，分子筛用的洗脱液都比较温和，还有一点NaCl的存在，照道理来说不会造成蛋白的不稳定呀。
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3楼2013-03-05 09:35:59
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once1015

木虫 (正式写手)
盐浓度低了吧
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4楼2013-03-05 16:34:21
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chinalfx

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-03-05 09:35:59
分子筛之前就沉淀了还是分子筛之后放置了几个小时沉淀？照理说分子筛之后蛋白浓度不大，不太容易沉淀呀。絮状的东西是不是蛋白不好说，我们以前碰到过，透析的时候出现絮状的，跑胶发现那根本不是蛋白，推测是脂类之 ...

跑了胶,是蛋白阿,不知道咋搞的,蛋白放几个小时就全沉掉了
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菲律宾啊菲律宾
5楼2013-03-05 20:27:12
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xiangquanju

金虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
5楼: Originally posted by chinalfx at 2013-03-05 20:27:12
跑了胶,是蛋白阿,不知道咋搞的,蛋白放几个小时就全沉掉了...

我之前有个蛋白也是放置过夜就全部变成乳白色的，因为我的蛋白浓度很高，还有蛋白可能在这个溶液中不稳定，最后我将刚刚分子筛纯化之后的样品进行了测试，设置了不同浓度梯度的甘油，盐，并且放置在室温和冷室。最后发现含高浓度盐（0.5M）和放置室温的蛋白没有沉淀，但是最后我选择了将盐浓度提高到0.5M，蛋白就不再出现之前的情况了！
仅供参考！
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6楼2013-03-05 22:55:21
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alicelchf

木虫 (著名写手)
★
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温度？如何？蛋白稳定性呢
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修身、齐家、治国、平天下
7楼2013-03-06 00:24:37
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chinalfx

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by alicelchf at 2013-03-06 00:24:37
温度？如何？蛋白稳定性呢

4度纯化，蛋白貌似是形成了聚合体
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菲律宾啊菲律宾
8楼2013-03-07 19:00:06
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alicelchf

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by chinalfx at 2013-03-07 19:00:06
4度纯化，蛋白貌似是形成了聚合体...

你调一下PH吧，这个是最有可能的影响因素了
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修身、齐家、治国、平天下
9楼2013-03-07 20:47:19
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