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chinalfx

银虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白纯化的问题 已有5人参与

我的过分子筛蛋白纯化几个小时就产生很多的絮状沉淀,蛋白怎么就没了呢?絮状的沉淀是蛋白吗?
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菲律宾啊菲律宾
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jiangyhai

金虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
SDS-PAGE鉴定下就知道了。
静心做事。
2楼2013-03-05 08:20:45
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
分子筛之前就沉淀了还是分子筛之后放置了几个小时沉淀?照理说分子筛之后蛋白浓度不大,不太容易沉淀呀。絮状的东西是不是蛋白不好说,我们以前碰到过,透析的时候出现絮状的,跑胶发现那根本不是蛋白,推测是脂类之类的东西。因此,你可以离心一下,检查上清液和沉淀里面哪里有你的蛋白。
再说了,分子筛用的洗脱液都比较温和,还有一点NaCl的存在,照道理来说不会造成蛋白的不稳定呀。
3楼2013-03-05 09:35:59
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once1015

木虫 (正式写手)

盐浓度低了吧
4楼2013-03-05 16:34:21
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chinalfx

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-03-05 09:35:59
分子筛之前就沉淀了还是分子筛之后放置了几个小时沉淀?照理说分子筛之后蛋白浓度不大,不太容易沉淀呀。絮状的东西是不是蛋白不好说,我们以前碰到过,透析的时候出现絮状的,跑胶发现那根本不是蛋白,推测是脂类之 ...

跑了胶,是蛋白阿,不知道咋搞的,蛋白放几个小时就全沉掉了
菲律宾啊菲律宾
5楼2013-03-05 20:27:12
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xiangquanju

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by chinalfx at 2013-03-05 20:27:12
跑了胶,是蛋白阿,不知道咋搞的,蛋白放几个小时就全沉掉了...

我之前有个蛋白也是放置过夜就全部变成乳白色的,因为我的蛋白浓度很高,还有蛋白可能在这个溶液中不稳定,最后我将刚刚分子筛纯化之后的样品进行了测试,设置了不同浓度梯度的甘油,盐,并且放置在室温和冷室。最后发现含高浓度盐(0.5M)和放置室温的蛋白没有沉淀,但是最后我选择了将盐浓度提高到0.5M,蛋白就不再出现之前的情况了!
仅供参考!
6楼2013-03-05 22:55:21
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alicelchf

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
温度?如何?蛋白稳定性呢
修身、齐家、治国、平天下
7楼2013-03-06 00:24:37
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chinalfx

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by alicelchf at 2013-03-06 00:24:37
温度?如何?蛋白稳定性呢

4度纯化,蛋白貌似是形成了聚合体
菲律宾啊菲律宾
8楼2013-03-07 19:00:06
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alicelchf

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by chinalfx at 2013-03-07 19:00:06
4度纯化,蛋白貌似是形成了聚合体...

你调一下PH吧,这个是最有可能的影响因素了
修身、齐家、治国、平天下
9楼2013-03-07 20:47:19
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