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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆测序不是目标条带
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dandan-baihe

银虫 (小有名气)

[求助] 克隆测序不是目标条带

做克隆测序，一共有四个样，分为两个处理，但结果一个处理是想要的目标条带，一个处理有80%以上都不是想要的目标条带。求助分析一下是什么原因，感觉结果好诡异啊！谢谢啦~~~
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1楼 2013-02-04 15:57:59
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weebug

版主 (著名写手)
两个处理都是相同手法吗？
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天蓝蓝兮日头晒
2楼2013-02-04 21:14:52
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冷酷的JING

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有非特异性扩增，且这些非特异条带与目标条带大小相近
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3楼2013-02-06 00:08:06
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xl0071334

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-02-27 20:48:33
应该是引物设计的问题，出现非特异条带。当时我们遇到这种问题，测序后发现只有引物与目的片段一样，当时郁闷死了！
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4楼2013-02-07 08:06:03
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jk_xdx

银虫 (小有名气)
这事儿很常见啊，具体情况具体分析吧
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5楼2013-02-07 08:55:18
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dandan-baihe

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by weebug at 2013-02-04 21:14:52
两个处理都是相同手法吗？

是滴，一批做的！
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6楼2013-02-26 23:12:37
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dandan-baihe

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jk_xdx at 2013-02-07 08:55:18
这事儿很常见啊，具体情况具体分析吧

谢谢啦，愁啊！
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7楼2013-02-26 23:13:29
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dandan-baihe

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 冷酷的JING at 2013-02-06 00:08:06
有非特异性扩增，且这些非特异条带与目标条带大小相近

那应该怎么处理啊？
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8楼2013-02-26 23:15:04
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冷酷的JING

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by dandan-baihe at 2013-02-26 23:15:04
那应该怎么处理啊？...

电泳时间长些，让所有条带分开，把目标长度的条带切下来回收（如果不确定就都切下来），再克隆测序。如果都不是目标片段就只能重新设计引物啦
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9楼2013-02-27 14:54:55
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