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dandan-baihe

银虫 (小有名气)

[求助] 克隆测序不是目标条带

做克隆测序,一共有四个样,分为两个处理,但结果一个处理是想要的目标条带,一个处理有80%以上都不是想要的目标条带。求助分析一下是什么原因,感觉结果好诡异啊!谢谢啦~~~
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xl0071334

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-02-27 20:48:33
应该是引物设计的问题,出现非特异条带。当时我们遇到这种问题,测序后发现只有引物与目的片段一样,当时郁闷死了!
4楼2013-02-07 08:06:03
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普通回帖

weebug

版主 (著名写手)

两个处理都是相同手法吗?
天蓝蓝兮日头晒
2楼2013-02-04 21:14:52
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冷酷的JING

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有非特异性扩增,且这些非特异条带与目标条带大小相近
3楼2013-02-06 00:08:06
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jk_xdx

银虫 (小有名气)

这事儿很常见啊,具体情况具体分析吧
5楼2013-02-07 08:55:18
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dandan-baihe

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by weebug at 2013-02-04 21:14:52
两个处理都是相同手法吗?

是滴,一批做的!
6楼2013-02-26 23:12:37
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dandan-baihe

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by jk_xdx at 2013-02-07 08:55:18
这事儿很常见啊,具体情况具体分析吧

谢谢啦,愁啊!
7楼2013-02-26 23:13:29
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dandan-baihe

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 冷酷的JING at 2013-02-06 00:08:06
有非特异性扩增,且这些非特异条带与目标条带大小相近

那应该怎么处理啊?
8楼2013-02-26 23:15:04
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冷酷的JING

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by dandan-baihe at 2013-02-26 23:15:04
那应该怎么处理啊?...

电泳时间长些,让所有条带分开,把目标长度的条带切下来回收(如果不确定就都切下来),再克隆测序。如果都不是目标片段就只能重新设计引物啦
9楼2013-02-27 14:54:55
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