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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌落PCR挑菌时的条件问题
汕头大学海洋科学接受调剂
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wangcaijuan

铁虫 (初入文坛)

[求助] 菌落PCR挑菌时的条件问题

我是一个分子生物新手，做PCR也才3个月不到。最近需要做克隆了，老师建议用菌落PCR筛选阳性克隆菌株。今天上午挑了20多个菌落来做PCR。条件什么的我都明白，只是看了实验室其他人在挑菌时直接在实验台上操作，而不是在超净台里。于是我今天也就那样干了，划完菌留种后，把tip头扔到了PCR管子里。可心里始终没底儿，所以问问各位高手，挑菌和划板时不在超净台上操作，无所谓吗？
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1楼 2013-02-01 13:49:31
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
挑菌、划线都应该在超净工作台做。
实际上我是先无菌枪头挑单克隆，在另一个平板上点一下，并做好编号。然后再用这个枪头在PCR管里搅动若干下，P出阳性克隆后可以直接找对应编号的克隆，摇菌提质粒做进一步鉴定。
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2楼2013-02-02 12:53:42
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feilongtc07

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wangcaijuan: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-02-05 15:08:23
其实做多了以后为了方便往往可能不在超净台里的~
严格来说应该菌落挑取什么都在超净台内~  问题应该不大~
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3楼2013-02-04 13:27:31
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wangcaijuan

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by feilongtc07 at 2013-02-04 13:27:31
其实做多了以后为了方便往往可能不在超净台里的~
严格来说应该菌落挑取什么都在超净台内~  问题应该不大~

谢谢回复~~反正已经那么做了。
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4楼2013-02-04 16:19:56
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wangcaijuan

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-02-02 12:53:42
挑菌、划线都应该在超净工作台做。
实际上我是先无菌枪头挑单克隆，在另一个平板上点一下，并做好编号。然后再用这个枪头在PCR管里搅动若干下，P出阳性克隆后可以直接找对应编号的克隆，摇菌提质粒做进一步鉴定。

就是说这一系列都在超净台里弄吗？
包括把枪头扔到PCR管中也在超净台里？
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5楼2013-02-04 16:21:08
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by wangcaijuan at 2013-02-04 16:21:08
就是说这一系列都在超净台里弄吗？
包括把枪头扔到PCR管中也在超净台里？...

是的。虽然PCR操作一般不需要在超净台里做，但挑菌的过程应该是无菌环境比较好。
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6楼2013-02-05 07:21:30
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wangcaijuan

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-02-05 07:21:30
是的。虽然PCR操作一般不需要在超净台里做，但挑菌的过程应该是无菌环境比较好。...

多谢！下次开始注意起来~~
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7楼2013-02-05 11:07:52
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

主要看你们实验室环境，
我在美国这边实验室内空气10min换一次，倒LB也都在外面做，做了两年就污染过不超过5次。
挑菌什么的更无所谓了
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8楼2013-02-05 11:25:06
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wangcaijuan

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-02-05 11:25:06
主要看你们实验室环境，
我在美国这边实验室内空气10min换一次，倒LB也都在外面做，做了两年就污染过不超过5次。
挑菌什么的更无所谓了

楼主悲催的在日本，这叫一个拥挤不堪。
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9楼2013-02-05 13:36:26
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by wangcaijuan at 2013-02-05 11:07:52
多谢！下次开始注意起来~~...

其实，即使不要求无菌的实验，细菌的操作也最好在超净工作台里，也可以减少工程菌扩散。
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10楼2013-02-05 14:03:23
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