24小时热门版块排行榜    

查看: 2357  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

deepocean123

新虫 (初入文坛)

[求助] 提不出质粒的问题

本人菌落PCR成功的筛出了菌,将阳性菌挑出来摇菌也能摇起来,但是提不出质粒来或者浓度特别低,这是为什么呢?我换了不同的样,提了好几次了,就是不行。我用的是克隆载体--pEASY。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kagamiya

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我第一反应就是质粒提取试剂盒的问题
如果你是要提质粒送测序的话,劝你别费劲了,直接送菌液,然后让测序公司把提好的质粒返回给你,你再做转化、表达。
如果能这样解决问题,那就不要去费时间纠结小问题了
如果不行,你再来这里问吧。。。。
9楼2013-03-23 00:00:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

weebug

版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看在LB里长你的菌株,扩增质粒量。或加入抗生素。当没筛选环境时,菌株通常会把质粒排除。
天蓝蓝兮日头晒
2楼2013-01-28 15:04:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

deepocean123

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by weebug at 2013-01-28 15:04:14
看在LB里长你的菌株,扩增质粒量。或加入抗生素。当没筛选环境时,菌株通常会把质粒排除。

摇菌的时候是用的LB氨苄抗性的液体培养基,挑出来之前的菌落是长在含有氨苄抗性的LB固体培养基的。我这个应该是算筛选环境吧~?
3楼2013-01-28 23:01:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

putine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR用的引物是载体的还是载体加片段的?会不会是假阳性。你说提出的质粒浓度特别低,可以做测序或者酶切吗?
4楼2013-01-29 01:03:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 28/1400 2026-08-13 17:51 by 医学老男孩
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
请填处理意见