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yishu2012

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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散金: 200
红花: 3
帖子: 199
在线: 137.9小时
虫号: 1671533
注册: 2012-03-07
性别: MM
专业: 发育生物学

[求助] 克隆做不出来，求帮助

做克隆一个月了，始终有两个做不出来。都是大约2000bp的长度。
1.载体：pFASTbac-gp67
感受态：DH5a
用BamHI和XhoI双酶切
酶切37度，4小时
连接有时候过夜连，菌落很少，而且菌液pcr P不出来。
2.载体：pFASTbac-Hem
感受态：DH5a
用BglII和XhoI双酶切
酶切37度，4小时
连接有时候过夜连，菌落很少，而且菌液pcr P不出来
酶切体系：回收片段43ul 酶1.2各1ul buffer 5ul BSA 0.5ul
连接体系：回收酶切产物 12ul T4连接酶1ul buffer 1.5ul 载体 0.5ul

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1楼 2013-01-23 16:04:36

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小小平凡

新虫 (初入文坛)

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专业: 免疫生物学

【答案】应助回帖

我也出现过这样的问题，将载体凝胶电泳后发现条带亮度很弱，是载体浓度不够。你可以将载体跑个电泳试试。

19楼2013-05-05 21:54:03

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