24小时热门版块排行榜    

查看: 683  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wo_niu

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切后连接

Mlu I 和Xho I 双酶切空载质粒pTRIPZ 和带有shRNAmir片段的GIPZ质粒,之后连接shRNAmir小片段(约345bp)和载体片段(约13kbp),用的是T4连接酶,16度过夜,但转化后什么都不长,经验证转化没有问题,应该是连接出了问题,请各位大虫赐教如何进行连接。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wo_niu: 金币+5, 有帮助 2013-01-21 12:58:35
引用回帖:
3楼: Originally posted by wo_niu at 2013-01-18 16:35:23
已用过10:1之比例,还是没有哦...

你确定两个酶都切割完全?xhoI好像切超螺旋质粒比较困难,需要多加酶量。小片段切的酶切位点是否做了足够的保护碱基?这两个酶好像在末端的效率都比较低下,需要切过夜。
4楼2013-01-19 08:16:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
插入片段和载体分子量相差比较多,所以难连。加大插入片段比例,建议分子数目用10:1或者更高。
2楼2013-01-18 15:19:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wo_niu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-18 15:19:54
插入片段和载体分子量相差比较多,所以难连。加大插入片段比例,建议分子数目用10:1或者更高。

已用过10:1之比例,还是没有哦
3楼2013-01-18 16:35:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 299求调剂 +4 15188958825 2026-03-25 4/200 2026-03-25 22:56 by 418490947
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 303求调剂 +6 元夕元 2026-03-20 7/350 2026-03-25 12:00 by edmund7
[考研] 求调剂323材料与化工 +4 1124361 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:19 by shulmg
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-20 4/200 2026-03-25 10:16 by allen-yin
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:46 by 星空星月
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪!?!
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 石河子大学(211、双一流)硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 材料与化工(0856)304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 0856调剂,是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
信息提示
请填处理意见