[求助] western blot p-erk

最近实验要做western blot 测erk、p-erk加药后含量变化。
实验室用的RIPA裂解液配方为：50mM Tris-HCl、150mM NaCl、1mMEDTA、1% TritonX-100、1%脱氧胆酸钠、0.1% SDS。蛋白酶抑制剂用的是PMSF，现在想问一下有没有做过类似实验的帮我看一下配方能提出我想要的蛋白吗？是不是还应该加磷酸酶抑制剂？是的话应该加什么物质，浓度是多少？还有就是我是western新手，测磷酸化蛋白有没有什么注意事项啊，希望有做过的战友帮忙分享点宝贵经验，感激不尽！

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孝文要加油

1楼 2013-01-10 18:05:32

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porphybaby

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

PMSF可能不足以抑制所有蛋白酶的活性。

建议你去买一个罗氏的产品叫 Roche complete，Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-free. 具体什么名字我忘了。
它是一种混合片剂，可以溶在裂解中，抑制多种蛋白酶的活性。

好像现在出了一款升级版，里头就加了磷酸酶抑制剂的。但这种cocktail 药片比较贵，你可以问问那些代理公司有没有散装的卖。

然后你注意在样品处理的时候要冰浴，一定要在冰上进行，保持低温。还有

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