24小时热门版块排行榜

南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知

返回列表

nalanyuhang

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 84
散金: 5
红花: 1
帖子: 46
在线: 14.2小时
虫号: 1055498
注册: 2010-07-11
性别: MM
专业: 肿瘤病因

[求助] western blot p-erk

最近实验要做western blot 测erk、p-erk加药后含量变化。
实验室用的RIPA裂解液配方为：50mM Tris-HCl、150mM NaCl、1mMEDTA、1% TritonX-100、1%脱氧胆酸钠、0.1% SDS。蛋白酶抑制剂用的是PMSF，现在想问一下有没有做过类似实验的帮我看一下配方能提出我想要的蛋白吗？是不是还应该加磷酸酶抑制剂？是的话应该加什么物质，浓度是多少？还有就是我是western新手，测磷酸化蛋白有没有什么注意事项啊，希望有做过的战友帮忙分享点宝贵经验，感激不尽！

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有99人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

求助western blot灰度分析的单位已经有6人回复
想检测一个大约4kD 的小肽片段，western blot 一直没有条带怎么办已经有21人回复
western blot出现多条带是什么原因已经有8人回复
Western-blot 实验的目的条带已经有9人回复
P-AKT/AKTwestern blot 已经有7人回复
western blot 在柱形图上的数值能代表蛋白的真实含量吗？？？已经有3人回复
western blot显影已经有7人回复
western blot的阴性对照怎么设计啊？已经有4人回复
请大家帮我看一下我的western blot的图已经有12人回复
Western blot目的条带显影后怎么会这样？？？看图片已经有8人回复
P糖蛋白的western blot条件已经有5人回复
夏天Western Blot 曝光总是白片已经有11人回复
western blot 的加养量如何确定以及调整，已经有8人回复
讨论一下western blot的毒性问题已经有8人回复
western blot没有结果是怎么回事~~ 已经有12人回复
关于western blot样品制备已经有8人回复
western blot 条带已经有15人回复
western blot 出不来结果！！！已经有17人回复
western-blot 技术已经有12人回复
Western Blot出现问题已经有19人回复
有没有人用Western blot在做17kDa蛋白质,求经验！！！已经有22人回复
【求助/交流】western blot 的一抗二抗由来？已经有4人回复
【求助/交流】western blot用奶粉封闭的原理已经有18人回复
Western Blot 磷酸化蛋白测定问题已经有9人回复
原创首发：Tips for Western Blot-一些小技巧而已已经有13人回复

孝文要加油

1楼2013-01-10 18:05:32

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

porphybaby

金虫 (正式写手)

应助: 89 (初中生)
金币: 948.3
散金: 16
红花: 6
帖子: 395
在线: 87小时
虫号: 1162143
注册: 2010-12-04
性别: GG
专业: 化学生物学与生物有机化学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

PMSF可能不足以抑制所有蛋白酶的活性。

建议你去买一个罗氏的产品叫 Roche complete，Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-free. 具体什么名字我忘了。
它是一种混合片剂，可以溶在裂解中，抑制多种蛋白酶的活性。

好像现在出了一款升级版，里头就加了磷酸酶抑制剂的。但这种cocktail 药片比较贵，你可以问问那些代理公司有没有散装的卖。

然后你注意在样品处理的时候要冰浴，一定要在冰上进行，保持低温。还有

赞一下

回复此楼

2楼2013-01-10 18:50:39

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

相关版块跳转我要订阅楼主 nalanyuhang 的主题更新

返回列表