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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western blot 的加养量如何确定以及调整，
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lym19890612

新虫 (小有名气)

[求助] western blot 的加养量如何确定以及调整，

根据我这次的实验结果，上面为目的蛋白，下面为内参，想增加目的蛋白的亮度，另外，我想改用1mm的板，合适的上样量体积

201305121859  .jpg
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1楼2013-05-12 20:22:06
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回帖置顶 ( 共有1个 )

springnamao

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lym19890612(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-13 12:54:49
gyesang: 回帖置顶 2013-05-13 12:55:08
你这次的内参还是很亮啊，都连在一起了，可以减少上样量，试试看用1.0的板子，内参亮不亮，最简单的提高目的蛋白亮度的方法不就是提高抗体浓度么，你舍得的话~
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生如夏花
3楼2013-05-13 09:28:33
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
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lym19890612(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-12 22:50:04
增加上样量的话内参和目的蛋白会的信号会同时增强的。减小目的蛋白一抗的稀释倍数或者加大内参的稀释倍数。
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2楼2013-05-12 22:46:07
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rainblue007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lym19890612(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-13 12:54:56
1.同意楼上关于抗体稀释的做法；
2.对于您这种相邻泳道条带连接在一起的情况，建议先将凝胶用电泳缓冲液浸泡20~30min，再上样电泳。
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4楼2013-05-13 10:32:21
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lym19890612

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by rainblue007 at 2013-05-13 10:32:21
1.同意楼上关于抗体稀释的做法；
2.对于您这种相邻泳道条带连接在一起的情况，建议先将凝胶用电泳缓冲液浸泡20~30min，再上样电泳。

谢谢哦，我要试试
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5楼2013-05-13 15:16:37
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lym19890612

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by springnamao at 2013-05-13 09:28:33
你这次的内参还是很亮啊，都连在一起了，可以减少上样量，试试看用1.0的板子，内参亮不亮，最简单的提高目的蛋白亮度的方法不就是提高抗体浓度么，你舍得的话~

提高了抗体浓度，效果不好啊
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6楼2013-05-19 10:11:00
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lym19890612

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by rainblue007 at 2013-05-13 10:32:21
1.同意楼上关于抗体稀释的做法；
2.对于您这种相邻泳道条带连接在一起的情况，建议先将凝胶用电泳缓冲液浸泡20~30min，再上样电泳。

这个倒是挺有用的，这次跑的不连了
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7楼2013-05-19 10:11:38
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rainblue007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by lym19890612 at 2013-05-19 10:11:38
这个倒是挺有用的，这次跑的不连了...

有用吧。来，叫声师兄听听
别提高抗体浓度啦，减小内参抗体浓度吧，再适当延长曝光时间，好运！
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8楼2013-05-20 09:59:09
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cathy521125

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lym19890612 at 2013-05-19 10:11:38
这个倒是挺有用的，这次跑的不连了...

请问是在电泳液里浸泡20~30min中后再拔梳子吗？
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9楼2013-12-30 11:48:11
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