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lym19890612

新虫 (小有名气)

[求助] western blot 的加养量如何确定以及调整,

根据我这次的实验结果,上面为目的蛋白,下面为内参,想增加目的蛋白的亮度,另外,我想改用1mm的板,合适的上样量体积

201305121859  .jpg
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rainblue007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
lym19890612(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-13 12:54:56
1.同意楼上关于抗体稀释的做法;
2.对于您这种相邻泳道条带连接在一起的情况,建议先将凝胶用电泳缓冲液浸泡20~30min,再上样电泳。
4楼2013-05-13 10:32:21
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查看全部 9 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
lym19890612(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-12 22:50:04
增加上样量的话内参和目的蛋白会的信号会同时增强的。减小目的蛋白一抗的稀释倍数或者加大内参的稀释倍数。
2楼2013-05-12 22:46:07
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springnamao

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
lym19890612(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-13 12:54:49
gyesang: 回帖置顶 2013-05-13 12:55:08
你这次的内参还是很亮啊,都连在一起了,可以减少上样量,试试看用1.0的板子,内参亮不亮,最简单的提高目的蛋白亮度的方法不就是提高抗体浓度么,你舍得的话~
生如夏花
3楼2013-05-13 09:28:33
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lym19890612

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by rainblue007 at 2013-05-13 10:32:21
1.同意楼上关于抗体稀释的做法;
2.对于您这种相邻泳道条带连接在一起的情况,建议先将凝胶用电泳缓冲液浸泡20~30min,再上样电泳。

谢谢哦,我要试试
5楼2013-05-13 15:16:37
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