应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 耐消毒剂基因PCR 急！在线等
51/1返回列表
查看: 831  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xmcxmyes

新虫 (小有名气)

[求助] 耐消毒剂基因PCR 急！在线等

样品1 梯度(51-62)2013-01-02 17hr 56min1.jpg(12.53KB)
http://kuai.xunlei.com/d/LnU4DabzQ53rUAQAfcc?p=130497

这个条带是258bp,我用50度的退火温度做，条带较浅，然后，做了个梯度扩增。51-62。发现上面第四泳道较好。即54度。便用54度继续扩增其他样品。但是结果却是下面这样。

前32个样2013-01-06 14hr 39min.jpg(13.78KB)
http://kuai.xunlei.com/d/LnU4DaTzHJ3rUAQAbb8?p=130497

我是分不解。不知道原因 ，其他的两个引物也是，只有在100bp处有较亮的不清晰的带，如图。我没有拍照。。谁能告诉我。怎么回事？？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-01-08 12:15:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by xmcxmyes at 2013-01-09 19:54:26
我不知道啊。我重新做了 退火温度梯度。效果还挺好。但是结果却没有出来目的条带。 好着急...

你是说做梯度的时候可以P出来，但上其它样品的时候不行？这样很奇怪。是不是样品的模板没提好？
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-10 06:57:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你确定是引物退火温度的问题吗？PCR用的什么模板？用量多少？此外，做退火温度梯度的时候是否做了重复？一般的引物在很大温度范围都会有不错的扩增，如果普遍条带不亮有可能和模板序列有关。你所说的100bp处模糊的带是引物二聚体吗？
赞一下 回复此楼
2楼2013-01-08 13:39:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmcxmyes

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-08 13:39:17
你确定是引物退火温度的问题吗？PCR用的什么模板？用量多少？此外，做退火温度梯度的时候是否做了重复？一般的引物在很大温度范围都会有不错的扩增，如果普遍条带不亮有可能和模板序列有关。你所说的100bp处模糊的带 ...

我不知道啊。我重新做了 退火温度梯度。效果还挺好。但是结果却没有出来目的条带。 好着急
赞一下 回复此楼
3楼2013-01-09 19:54:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmcxmyes

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-10 06:57:04
你是说做梯度的时候可以P出来，但上其它样品的时候不行？这样很奇怪。是不是样品的模板没提好？...

我觉得不会。 引物其他引物 都是可以做出来一些呀。。
赞一下 回复此楼
5楼2013-01-10 10:14:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:27 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 5/250 2026-08-08 17:02 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:47 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:22 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:19 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:02 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 WQyTGMbfH7Cx 2026-08-07 4/200 2026-08-08 15:02 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:22 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:07 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:07 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:01 by oEVWOejN9taj
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 3/150 2026-08-08 03:47 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭