24小时热门版块排行榜    

查看: 682  |  回复: 6

xmcxmyes

新虫 (小有名气)

[求助] 耐消毒剂基因PCR 急!在线等

样品1 梯度(51-62)2013-01-02 17hr 56min1.jpg(12.53KB)
http://kuai.xunlei.com/d/LnU4DabzQ53rUAQAfcc?p=130497

这个条带是258bp,我用50度的退火温度做,条带较浅,然后,做了个梯度扩增。51-62。发现上面第四泳道较好。即54度。便用54度继续扩增其他样品。但是结果却是下面这样。

前32个样2013-01-06 14hr 39min.jpg(13.78KB)
http://kuai.xunlei.com/d/LnU4DaTzHJ3rUAQAbb8?p=130497

我是分不解。不知道原因 ,其他的两个引物也是,只有在100bp处有较亮的不清晰的带,如图。我没有拍照。。谁能告诉我。怎么回事??
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你确定是引物退火温度的问题吗?PCR用的什么模板?用量多少?此外,做退火温度梯度的时候是否做了重复?一般的引物在很大温度范围都会有不错的扩增,如果普遍条带不亮有可能和模板序列有关。你所说的100bp处模糊的带是引物二聚体吗?
2楼2013-01-08 13:39:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmcxmyes

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-08 13:39:17
你确定是引物退火温度的问题吗?PCR用的什么模板?用量多少?此外,做退火温度梯度的时候是否做了重复?一般的引物在很大温度范围都会有不错的扩增,如果普遍条带不亮有可能和模板序列有关。你所说的100bp处模糊的带 ...

我不知道啊。我重新做了 退火温度梯度。效果还挺好。但是结果却没有出来目的条带。 好着急
3楼2013-01-09 19:54:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by xmcxmyes at 2013-01-09 19:54:26
我不知道啊。我重新做了 退火温度梯度。效果还挺好。但是结果却没有出来目的条带。 好着急...

你是说做梯度的时候可以P出来,但上其它样品的时候不行?这样很奇怪。是不是样品的模板没提好?
4楼2013-01-10 06:57:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmcxmyes

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-10 06:57:04
你是说做梯度的时候可以P出来,但上其它样品的时候不行?这样很奇怪。是不是样品的模板没提好?...

我觉得不会。 引物其他引物 都是可以做出来一些呀。。
5楼2013-01-10 10:14:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by xmcxmyes at 2013-01-10 10:14:06
我觉得不会。 引物其他引物 都是可以做出来一些呀。。...

这可不一定。因为一般提基因组DNA的方法得到的不会是完整的染色体,都是shear成几十Kb的片段。如果操作时机械力大的话,片段会更小。有时候你要P的DNA被破坏的更为严重的话就会出现有的引物可以P出来,有的引物却效果很差。
6楼2013-01-10 10:53:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmcxmyes

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-10 10:53:50
这可不一定。因为一般提基因组DNA的方法得到的不会是完整的染色体,都是shear成几十Kb的片段。如果操作时机械力大的话,片段会更小。有时候你要P的DNA被破坏的更为严重的话就会出现有的引物可以P出来,有的引物却效 ...

哦,我是用水煮法提取的。估计是DNA不完整。尤其是在扩质粒型基因的时候,有很多非特异扩增,您知道原因吗?
7楼2014-02-24 02:53:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xmcxmyes 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +3 章小鱼567 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:46 by zhouxuan..
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +7 holy J 2026-03-21 7/350 2026-03-24 17:24 by xiaohai104
[考研] 070300化学求调剂 +9 苑豆豆 2026-03-20 9/450 2026-03-24 17:15 by licg0208
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:46 by 星空星月
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 生物学一志愿985,分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 一志愿070300浙大化学358分,求调剂! +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 一志愿华中农业071010,总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-20 3/150 2026-03-22 16:00 by ColorlessPI
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考博] 招收博士1-2人 +3 QGZDSYS 2026-03-18 4/200 2026-03-22 10:25 by QGZDSYS
[考研] 一志愿南大,0703化学,分数336,求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 【同济软件】软件(085405)考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
信息提示
请填处理意见