应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 耐消毒剂基因PCR 急！在线等
71/1返回列表
查看: 825  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xmcxmyes

新虫 (小有名气)

[求助] 耐消毒剂基因PCR 急！在线等

样品1 梯度(51-62)2013-01-02 17hr 56min1.jpg(12.53KB)
http://kuai.xunlei.com/d/LnU4DabzQ53rUAQAfcc?p=130497

这个条带是258bp,我用50度的退火温度做，条带较浅，然后，做了个梯度扩增。51-62。发现上面第四泳道较好。即54度。便用54度继续扩增其他样品。但是结果却是下面这样。

前32个样2013-01-06 14hr 39min.jpg(13.78KB)
http://kuai.xunlei.com/d/LnU4DaTzHJ3rUAQAbb8?p=130497

我是分不解。不知道原因 ，其他的两个引物也是，只有在100bp处有较亮的不清晰的带，如图。我没有拍照。。谁能告诉我。怎么回事？？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-01-08 12:15:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你确定是引物退火温度的问题吗？PCR用的什么模板？用量多少？此外，做退火温度梯度的时候是否做了重复？一般的引物在很大温度范围都会有不错的扩增，如果普遍条带不亮有可能和模板序列有关。你所说的100bp处模糊的带是引物二聚体吗？
赞一下 回复此楼
2楼2013-01-08 13:39:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmcxmyes

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-08 13:39:17
你确定是引物退火温度的问题吗？PCR用的什么模板？用量多少？此外，做退火温度梯度的时候是否做了重复？一般的引物在很大温度范围都会有不错的扩增，如果普遍条带不亮有可能和模板序列有关。你所说的100bp处模糊的带 ...

我不知道啊。我重新做了 退火温度梯度。效果还挺好。但是结果却没有出来目的条带。 好着急
赞一下 回复此楼
3楼2013-01-09 19:54:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by xmcxmyes at 2013-01-09 19:54:26
我不知道啊。我重新做了 退火温度梯度。效果还挺好。但是结果却没有出来目的条带。 好着急...

你是说做梯度的时候可以P出来，但上其它样品的时候不行？这样很奇怪。是不是样品的模板没提好？
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-10 06:57:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmcxmyes

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-10 06:57:04
你是说做梯度的时候可以P出来，但上其它样品的时候不行？这样很奇怪。是不是样品的模板没提好？...

我觉得不会。 引物其他引物 都是可以做出来一些呀。。
赞一下 回复此楼
5楼2013-01-10 10:14:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by xmcxmyes at 2013-01-10 10:14:06
我觉得不会。 引物其他引物 都是可以做出来一些呀。。...

这可不一定。因为一般提基因组DNA的方法得到的不会是完整的染色体，都是shear成几十Kb的片段。如果操作时机械力大的话，片段会更小。有时候你要P的DNA被破坏的更为严重的话就会出现有的引物可以P出来，有的引物却效果很差。
赞一下 回复此楼
6楼2013-01-10 10:53:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmcxmyes

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-10 10:53:50
这可不一定。因为一般提基因组DNA的方法得到的不会是完整的染色体，都是shear成几十Kb的片段。如果操作时机械力大的话，片段会更小。有时候你要P的DNA被破坏的更为严重的话就会出现有的引物可以P出来，有的引物却效 ...

哦，我是用水煮法提取的。估计是DNA不完整。尤其是在扩质粒型基因的时候，有很多非特异扩增，您知道原因吗？
赞一下 回复此楼
7楼2014-02-24 02:53:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xmcxmyes 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 21/1050 2026-08-07 14:23 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +22 布布和一二 2026-08-06 45/2250 2026-08-07 14:14 by 日月天地
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +23 低垂的野花 2026-07-31 31/1550 2026-08-07 12:22 by speculiar
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 基金中了 +11 laoda193707 2026-08-06 11/550 2026-08-07 10:54 by TT和NN
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +4 archvillain 2026-08-06 8/400 2026-08-07 08:06 by 带你看大海
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[论文投稿] 十年后又回来了，论文投稿求助 +3 哈哈114477 2026-08-01 3/150 2026-08-04 15:40 by tegsgjy20
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭