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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 不知道为什么用猪的肠道的cDNA 一直都无法PCR出目的条带
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冰凝草

木虫 (小有名气)

[求助] 不知道为什么用猪的肠道的cDNA 一直都无法PCR出目的条带

最近一直在努力从猪的肠道的cDNA 中PCR出目的条带，是APN这个基因的条带，一开始的时候是使用的DNA，但是由于设计的引物是以mRNA为依据的，所以后来开始换用RNA反转录形成的cDNA，目的条带不是很大，只有3Kb左右，是一开始设计的全长的引物，但是没有结果，所以设计了两段只有500bp 大小的引物，都成功的PCR出目的条带了，鉴定也是对的，所以就又重新设计两段1.5Kb 的引物，为了做重叠PCR，但是还是没有结果。
最后设计的引物的上下游的Tm值相差较大，但是试了48、53、55、57、59之后都是没有条带，不知道是什么原因呢？
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1楼 2012-12-29 22:25:54
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你怎么知道反转录以后有没有剪切。

说不定你的后来1。5kb的就剪切掉了一部分呢。
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2楼2012-12-30 14:53:28
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