| 查看: 1993 | 回复: 12 | ||
[求助]
大肠杆菌转化
|
||
| 最近在做载体构建、转化大肠杆菌的实验，具体流程是先准备好pMD19T-A与pET-28a载体，我要将A插入pET-28a做表达，两个载体同时酶切，回收目的条带，酶联过夜，转化DH5a感受态细胞。现在问题是，转化子长了挺多，但是有大有小，挑几个做菌落PC鉴定，有目的大小的条带，但是有时候弱，有时候强，然后活化菌提质粒，电泳结果是条带有时候大小不正确，有时候干脆没有。后来还发现转化子的平板在室温下放置2天，菌落就会长的很大，像是酵母。重复了很多次，换了限制性内切酶、连接酶、感受态细胞，但是最终还是失败，请各位同行赐教，万分感谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有173人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 摇的转化到大肠杆菌的质粒有沉淀
已经有20人回复
- 关于大肠杆菌转化
已经有10人回复
- 转化大肠杆菌平板出现卫星菌落是怎么回事？
已经有12人回复
- 转化大肠杆菌后，涂板为什么都是模糊不清的菌？
已经有21人回复
- 求助！大肠杆菌转化不长菌落~
已经有28人回复
- 本来带有质粒的大肠杆菌再对它进行一次质粒转化能达到增加质粒拷贝数的目的吗？
已经有10人回复
- 我想将pcr片段转入大肠杆菌内
已经有19人回复
- 连接转化进大肠杆菌BL21
已经有6人回复
- 质粒转化到大肠杆菌野生菌中验证遇到的非常非常怪的问题
已经有3人回复
- 大肠杆菌电转感受态细胞的制备中遇到的问题
已经有8人回复
- 转化遭遇红霉素对大肠杆菌失效！
已经有13人回复
- 大肠杆菌转化时出现异常现象
已经有10人回复
- 大肠杆菌转化求助
已经有3人回复
- 克隆基因和载体连接后转化至大肠杆菌，为什么每次涂板都是空平板没有菌落？
已经有17人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌转化PCR鉴定，没有阳性菌落
已经有5人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌转化质粒，出来的不是我要的了，怎么回事？
已经有13人回复
- 【求助/交流】转化后的大肠杆菌复苏的转速有影响吗?
已经有6人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌感受态制备及转化中的问题
已经有3人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母质粒转化大肠杆菌
已经有11人回复
- 重组后的大肠杆菌培养以后怎么变红了
已经有23人回复
wen1023tao
铜虫 (小有名气)
- 应助: 27 (小学生)
- 金币: 176.1
- 红花: 1
- 帖子: 82
- 在线: 20.9小时
- 虫号: 1387766
- 注册: 2011-09-02
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-01-04 13:49:14
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-01-04 13:49:14
|
长大小不一的菌落，应该是染杂菌了 可能是感受态染杂菌了，换新做的，做的时候仔细些，或者多挑几个（六个菌落左右）在一个管子里面摇菌，因为感受态是在无菌培养基中培养，没有抗性，多挑几个利用种群竞争来抗下杂菌生长，或者直接去买感受态 也可能是做转化过程染菌了，建议在 超净台操作 还可能是抗生素失效了，或者部分失效，导致有小菌落的杂菌生长，建议换抗生素或者加大抗生素浓度 至于平板在室温下长得很大应该是正常的，一般都储层在4度左右，室温25度，大肠杆菌的繁殖速度还是很快的 |
4楼2012-12-29 14:02:52
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
2楼2012-12-29 11:09:04
3楼2012-12-29 12:13:08
liudianlei
银虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 197
- 散金: 10
- 帖子: 52
- 在线: 23小时
- 虫号: 1811883
- 注册: 2012-05-12
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2012-12-29 19:59:06
xj0311
木虫 (小有名气)
- 应助: 42 (小学生)
- 金币: 2112.1
- 帖子: 119
- 在线: 28.5小时
- 虫号: 1790392
- 注册: 2012-05-02
- 性别: GG
- 专业: 病原微生物变异与耐药
6楼2012-12-29 22:45:33
xj0311
木虫 (小有名气)
- 应助: 42 (小学生)
- 金币: 2112.1
- 帖子: 119
- 在线: 28.5小时
- 虫号: 1790392
- 注册: 2012-05-02
- 性别: GG
- 专业: 病原微生物变异与耐药
7楼2012-12-29 22:48:17
xiaohong1213
银虫 (初入文坛)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 495.9
- 红花: 1
- 帖子: 38
- 在线: 38.8小时
- 虫号: 1901407
- 注册: 2012-07-19
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
8楼2012-12-30 11:02:05
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 3232.6
- 散金: 1266
- 红花: 43
- 帖子: 2256
- 在线: 276.6小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
9楼2012-12-30 13:33:03
Renavatio
木虫 (小有名气)
- 应助: 25 (小学生)
- 金币: 1312.6
- 散金: 50
- 红花: 2
- 帖子: 138
- 在线: 131.8小时
- 虫号: 1416599
- 注册: 2011-09-25
- 性别: GG
- 专业: 基因组学
10楼2012-12-30 23:14:26
