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养活它

新虫 (初入文坛)

[求助] LAMP引物问题

各位大侠,你们好,我初入分子这一领域,想请大家教一下怎么样设计引物,有大体流程即可。谢谢。(以金黄色葡萄球菌为例)
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q317476148

铁杆木虫 (著名写手)

喵星人

【答案】应助回帖

搜索文献上提及的引物用于实验的具体步骤:
1.        先搜索与本实验相似或相同文献上提及的目标基因引物序列(以小鼠Mefc为例);
2.        在http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore网站上搜索“mousemefc”,出现多个搜索结果,选择“MusmusculusmyocyteenhancerfactorC,mRNA(cDNAcloneMGC:IMAGE,”打开后点击“CDS”,出现编码区域的碱基序列。
3.        验证文献引物的正确性:(在word上操作即可)
①“ctrl+F”的对话框中键入F引物,即GCGCAGGGAATGGATACGG,点击确定在全文中搜索此序列,即可找到F引物对应的CDS中的位置;
②“ctrl+F”的对话框中键入R引物配对碱基的’-’方向,即“GCAAGAATAGGGTGGACCGT”,点击确定在全文中搜索此序列,即可找到R引物对应的CDS中的位置。
另注:由于反转录中的模板是mRNA(单链),所以只需要在反转录反应液中加入R引物。
5楼2012-12-23 16:31:00
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hylee103

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
http://primerexplorer.jp/e/在线软件设计引物
2楼2012-12-20 15:23:21
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养活它

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hylee103 at 2012-12-20 15:23:21
用http://primerexplorer.jp/e/在线软件设计引物

问题是,我不会找靶基因,在NCBI中怎么查找?自己琢磨半天,仍然不会啊。。
3楼2012-12-20 16:10:28
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hylee103

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 养活它 at 2012-12-20 16:10:28
问题是,我不会找靶基因,在NCBI中怎么查找?自己琢磨半天,仍然不会啊。。...

在Genbank里输入你要找的基因,种属就可以找到了!
4楼2012-12-20 16:23:33
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