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LAMP引物问题
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| 各位大侠，你们好，我初入分子这一领域，想请大家教一下怎么样设计引物，有大体流程即可。谢谢。（以金黄色葡萄球菌为例） |
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hylee103
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q317476148
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【答案】应助回帖
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搜索文献上提及的引物用于实验的具体步骤： 1. 先搜索与本实验相似或相同文献上提及的目标基因引物序列（以小鼠Mefc为例）； 2. 在http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore网站上搜索“mousemefc”，出现多个搜索结果，选择“MusmusculusmyocyteenhancerfactorC,mRNA(cDNAcloneMGC:IMAGE  ,”打开后点击“CDS”,出现编码区域的碱基序列。3. 验证文献引物的正确性：（在word上操作即可） ①“ctrl+F”的对话框中键入F引物，即GCGCAGGGAATGGATACGG，点击确定在全文中搜索此序列，即可找到F引物对应的CDS中的位置； ②“ctrl+F”的对话框中键入R引物配对碱基的’-’方向，即“GCAAGAATAGGGTGGACCGT”,点击确定在全文中搜索此序列，即可找到R引物对应的CDS中的位置。 另注：由于反转录中的模板是mRNA(单链),所以只需要在反转录反应液中加入R引物。 |
5楼2012-12-23 16:31:00
