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surayuth

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1楼 2012-12-17 14:53:06
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
因为我们一般使用Taq酶克隆出来的基因两端含有PolyA，这段PolyA序列刚好与T载体两端的PolyT序列互补，这是为什么它们能连接的原因。
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keepon
2楼2012-12-17 16:05:47
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
T-vector的5'端有磷酸基，可以与插入片段的3'端相连。插入片段的5’端是OH基，不能与T-Vector的3’端相连。
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3楼2012-12-17 16:10:10
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surayuth

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
4楼2012-12-17 16:46:35
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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gyesang: 金币+1, 有帮助！ 2012-12-18 11:33:31
T载体一般不会去磷酸化处理。一般的单酶切后连接会考虑用磷酸化酶去除掉质粒末端的磷酸基团，使其不会发生自连；而片段仍然可以和这样的质粒连接，是因为刚连上时双链DNA只需要一条链连上也是可以的，转进大肠后，通过修复系统将切口连接；或者是以一条完整链为模板复制，另外一条链会修复好。
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5楼2012-12-17 17:53:51
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by surayuth at 2012-12-17 16:46:35
这个我知道啊，但是那只是一条链那么连的，比如是DNA的3‘端和载体的5’端连的。但DNA5’端一般都是没有磷酸化的，是个羟基，按理说是不能和载体的3‘端连的...

只需要一条链连上就可以了，在宿主菌里面有自动修补系统，一这条链为模板进行复制然后再复制。。。
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keepon
6楼2012-12-17 19:33:12
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2012-12-17 16:05:47
因为我们一般使用Taq酶克隆出来的基因两端含有PolyA，这段PolyA序列刚好与T载体两端的PolyT序列互补，这是为什么它们能连接的原因。

晕，不是"poly"A吧，Taq也就随机加一个A，
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7楼2012-12-18 08:54:07
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匿名

用户注销 (正式写手)
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8楼2012-12-19 22:31:22
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