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fayzhao金虫 (小有名气)
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双酶切后目的条带很淡，回收不到
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目前在做双酶切，目的是从T载体上把目的片段切下来，目的片段513bp。 用的是fermentas的常规内切酶，由于不能同时切，我选择的是连续酶切，以下是具体酶切体系。 第一种方案，具体如下，标记为1： 20ul体系：dd水 12ul 10xTango 2ul 质粒 5ul（约1ug） KpnI 1ul 37℃，5小时， 然后直接在管中再加入以下： 10xTango 2.5ul BglII 1ul 37℃，5小时 另一方案是从网上学的，具体如下，标记为2： 20ul体系：dd水 12ul 10xbuffer KpnI 2ul 质粒 5ul（约1ug） KpnI 1ul 37℃，5小时， 然后直接在管中再加入以下： dd水 25ul 10xbuffer 0 6ul BglII 1ul 37℃，5小时 但是双酶切之后，目的条带很淡，由于第一天时间不足，因此将酶切产物放在4℃，第二天切胶回收时没有回收到……请大家帮帮忙！O(∩_∩)O谢谢！ 图片如下：  顺序：质粒，双酶切1，双酶切2，2000marker.jpg |
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