10楼: Originally posted by lillian菲 at 2012-12-10 18:16:05
你好，我以前都做双酶切，产物量太少，进行下面实验太不方便，后来就用两次单酶切，每次酶切时体系用的多一点，纯化或回收的时候就不会有量太少的问题了

3楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-07 23:03:08
我查了一下楼主用的两个酶的buffer情况，的确他们不能共用buffer，且KpnI只能用KpnI buffer，楼主以上的两种切法都是可以的，看那个胶第二泳道其实可以回收了，也足够用于后续连接目标载体了，如果实在切不开的话。 ...

12楼: Originally posted by fayzhao at 2012-12-10 20:25:39
你好，我加大体系做了酶切，又试了用双酶切，都能切开，切胶回收之后电泳检测有条带，但是测的浓度很低，并且测出来的纯度也好奇怪，有的都3.0多了，浓度只有几ng/ul。
如果用于后续连接目标载体的话，至少需要多 ...

13楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-10 22:21:58
不用测浓度，只管往底下做，没有问题的，载体的量少一些，其余全加片段，楼主试一下...

11楼: Originally posted by fayzhao at 2012-12-10 20:19:30
我刚开始是做的两次单酶切，但是效果不好，就试了试能不能双酶切，结果可以切下来。但是回收之后浓度很低。一般浓度多少才能继续下面的连接转化实验呢？...

15楼: Originally posted by lillian菲 at 2012-12-11 11:00:22
你好，一般做下面的酶连转化实验，你看下酶连体系的说明书，上面有具体的浓度说明。一般我觉得浓度低了就多加点DNA体积，浓度高就少加点...