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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR扩增问题
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天yi

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增问题

最近在做PCR，开始是什么都没有扩增出来，之后降低退火温度，并且延长预变性时间，还是没有扩增出来，再后来提高了引物浓度结果只有引物二聚体没有目的条带，怎么回事？求高人指点，新手做PCR ，谢谢啊！
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1楼 2012-11-25 21:25:30
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
天yi: 金币+1 2012-11-26 11:29:06
1、你做的这个实验以前有没有人做出来？如果扩已知的片段，你确定模版没有问题之后，做一个退火梯度PCR试一试。
2、如果是扩未知的片段，就比较复杂点，引物特异性是首先要考虑的。
其实这些问你实验室的师兄师姐比较好，网上你说不清楚，别人也回答不清楚。
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2楼2012-11-25 21:45:27
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天yi

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2012-11-25 21:45:27
1、你做的这个实验以前有没有人做出来？如果扩已知的片段，你确定模版没有问题之后，做一个退火梯度PCR试一试。
2、如果是扩未知的片段，就比较复杂点，引物特异性是首先要考虑的。
其实这些问你实验室的师兄师姐 ...

是未知片段，我现在把模板稀释了一下，在摸索呢，
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3楼2012-11-26 11:30:05
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