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jackiey2

铜虫 (正式写手)

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[交流] 感受态细胞提取的质粒酶解后为什么带型不一样？已有7人参与

有个问题始终想不明白
重组质粒带有氨苄抗性基因。重组质粒导入感受态细胞后铺带氨苄的平板，长出来的菌落应该都是成功摄入重组质粒的吧？挑出来若干个单菌落扩大培养后提取质粒，用限制酶进行酶切，为什么切出来的带有的还不一样呢？
新手做分子，望高手解惑，谢谢。

[ Last edited by jackiey2 on 2012-7-30 at 09:16 ]

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遗传

1楼2012-07-30 08:57:45

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yuliansheng

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极应助，解答问题 2012-08-01 14:06:22

分析
问题点一：你的重组的质粒在导入感受态细胞之前，你能确定你所用的质粒和目的片段都很好的连接了吗？
问题点二：你的重组质粒在连接时，应该会有两种可能的。一是目的片段很好的连接到你所用的质粒上，得到你所要的重组质粒：二是你所用的质粒在你切完后，再用连接酶连接，质粒又发生自连。这两种质粒同时被导入感受态细胞后，你再进行验证时，会显示这两种质粒的片段大小。（而且，你的目的片段我不太了解。有时也可能发生目的片段被切后，再用连接酶进行连接时，也会发生自连。这样的话，最后的结果就有可能出现三种片段大小。）