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童心依旧

铁虫 (初入文坛)

[求助] 质粒的若干问题!!!

小弟小硕一名,最近会收到国外教授给的质粒,由于一点这方面的专业背景都没有
所以想请教一下各位老师,这个质粒需要在什么环境下保存?如果我想对其洗脱,提取,扩增,鉴定,都需要一些怎么样的步骤?
真的很不懂,但我会虚心学习,还请大家不吝赐教!
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tiangeyifang

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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-20℃的冰箱保存就可以了
2楼2012-11-21 12:06:48
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
寄过来之后需要-20保存,然后需要用的时候直接用ddH2O洗脱下来,然后做转化就可以的
3楼2012-11-21 12:19:38
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wangmingyue

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
-20保存是没有问题的,但是我分析教授寄给你的质粒肯定不足以完成你的后续实验,你需要将质粒洗脱下来之后,转化入菌体扩增培养,然后再将质粒从菌体中提取出来。建议看看大肠杆菌的转化和质粒的提取方面的书籍文献。转化后的菌体可以冷冻保存。这样无限扩增,保证够实验所用。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2012-11-21 18:54:52
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lo58688

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
-20是没有问题的,我们老板前段时间也让我做过同样的事情,先用ddH2O溶解,测浓度,转化DH5α或者gold菌中,扩增,保种,但要注意弄清楚你的载体的抗性。
5楼2012-11-21 21:02:50
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童心依旧

铁虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangmingyue at 2012-11-21 18:54:52
-20保存是没有问题的,但是我分析教授寄给你的质粒肯定不足以完成你的后续实验,你需要将质粒洗脱下来之后,转化入菌体扩增培养,然后再将质粒从菌体中提取出来。建议看看大肠杆菌的转化和质粒的提取方面的书籍文献 ...

有没有相关书籍可以推荐一下啊?
6楼2012-11-22 08:49:39
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wangmingyue

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 童心依旧 at 2012-11-22 08:49:39
有没有相关书籍可以推荐一下啊?...

只要跟大肠杆菌的转化和质粒提取相关的就可以,文献书籍随便在网上一搜就可以查到很多。我们本科时分子生物学实验就做过这个。转化一般采用氯化钙法,提取如果实验经费不紧张的话,可以直接买质粒提取试剂盒,Qiagen或Omega等很多牌子
7楼2012-11-22 09:06:03
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