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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒的若干问题！！！
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童心依旧

铁虫 (初入文坛)

[求助] 质粒的若干问题！！！

小弟小硕一名，最近会收到国外教授给的质粒，由于一点这方面的专业背景都没有
所以想请教一下各位老师，这个质粒需要在什么环境下保存？如果我想对其洗脱，提取，扩增，鉴定，都需要一些怎么样的步骤？
真的很不懂，但我会虚心学习，还请大家不吝赐教！
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1楼 2012-11-21 09:29:51
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tiangeyifang

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
-20℃的冰箱保存就可以了
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2楼2012-11-21 12:06:48
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
寄过来之后需要-20保存，然后需要用的时候直接用ddH2O洗脱下来，然后做转化就可以的
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3楼2012-11-21 12:19:38
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wangmingyue

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
-20保存是没有问题的，但是我分析教授寄给你的质粒肯定不足以完成你的后续实验，你需要将质粒洗脱下来之后，转化入菌体扩增培养，然后再将质粒从菌体中提取出来。建议看看大肠杆菌的转化和质粒的提取方面的书籍文献。转化后的菌体可以冷冻保存。这样无限扩增，保证够实验所用。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

童心依旧
4楼2012-11-21 18:54:52
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lo58688

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
-20是没有问题的，我们老板前段时间也让我做过同样的事情，先用ddH2O溶解，测浓度，转化DH5α或者gold菌中，扩增，保种，但要注意弄清楚你的载体的抗性。
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5楼2012-11-21 21:02:50
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童心依旧

铁虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangmingyue at 2012-11-21 18:54:52
-20保存是没有问题的，但是我分析教授寄给你的质粒肯定不足以完成你的后续实验，你需要将质粒洗脱下来之后，转化入菌体扩增培养，然后再将质粒从菌体中提取出来。建议看看大肠杆菌的转化和质粒的提取方面的书籍文献 ...

有没有相关书籍可以推荐一下啊？
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6楼2012-11-22 08:49:39
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wangmingyue

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 童心依旧 at 2012-11-22 08:49:39
有没有相关书籍可以推荐一下啊？...

只要跟大肠杆菌的转化和质粒提取相关的就可以，文献书籍随便在网上一搜就可以查到很多。我们本科时分子生物学实验就做过这个。转化一般采用氯化钙法，提取如果实验经费不紧张的话，可以直接买质粒提取试剂盒，Qiagen或Omega等很多牌子
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7楼2012-11-22 09:06:03
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