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求助 PMD 18T载体克隆转化详细不住
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elbo
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[
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求助 PMD 18T载体克隆转化详细不住
已有1人参与
目的片段200bp左右,根据宝生物说明书上貌似做不出来,请问前辈高人给予详细的实际操作步骤,不胜感激!
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1楼
2012-07-03 19:23:15
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elbo
金虫
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7楼
:
Originally posted by
游侠892
at 2012-07-05 11:02:21
连接反应
A. 检查试剂盒内的试剂是否完整(pMD 18-T Vector、solution I和control DNA),试剂盒必须存放在-20℃。操作前应该浏览一下试剂盒提供的说明书;
B. 开启载体(pMD 18-T Vector)所在的离心管前请先离心, ...
非常感谢
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9楼
2012-07-05 17:11:08
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Marado
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感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流
2012-07-04 13:44:44
给一个我们实验室常用的连接体系你吧:
pMD 18T:0.5ul
目的DNA:2.5ul
Solution I: 3ul
总计:6ul的体系
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼
2012-07-03 21:07:31
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Marado
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2楼
:
Originally posted by
Marado
at 2012-07-03 21:07:31
给一个我们实验室常用的连接体系你吧:
pMD 18T:0.5ul
目的DNA:2.5ul
Solution I: 3ul
总计:6ul的体系
实际DNA:载体的比例要根据你DNA的浓度来确定,一般是3:1~10:1的范围.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
3楼
2012-07-03 21:08:47
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第五平原
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流
2012-07-04 13:44:58
我们实验室的体系:
pMD 18T:1ul
目的DNA:4ul
Solution I: 5ul
总计:10ul的体系,16度过夜连接
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勤勉
4楼
2012-07-03 22:03:55
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