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elbo

金虫 (小有名气)

[求助] 求助 PMD 18T载体克隆转化详细不住 已有1人参与

目的片段200bp左右,根据宝生物说明书上貌似做不出来,请问前辈高人给予详细的实际操作步骤,不胜感激!
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elbo

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 游侠892 at 2012-07-05 11:02:21
连接反应
A.        检查试剂盒内的试剂是否完整(pMD 18-T Vector、solution I和control DNA),试剂盒必须存放在-20℃。操作前应该浏览一下试剂盒提供的说明书;
B.        开启载体(pMD 18-T Vector)所在的离心管前请先离心, ...

非常感谢
9楼2012-07-05 17:11:08
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-04 13:44:44
给一个我们实验室常用的连接体系你吧:
pMD 18T:0.5ul
目的DNA:2.5ul
Solution I: 3ul
总计:6ul的体系
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-07-03 21:07:31
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2012-07-03 21:07:31
给一个我们实验室常用的连接体系你吧:
pMD 18T:0.5ul
目的DNA:2.5ul
Solution I: 3ul
总计:6ul的体系

实际DNA:载体的比例要根据你DNA的浓度来确定,一般是3:1~10:1的范围.
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
3楼2012-07-03 21:08:47
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第五平原

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-04 13:44:58
我们实验室的体系:
pMD 18T:1ul
目的DNA:4ul
Solution I: 5ul
总计:10ul的体系,16度过夜连接
勤勉
4楼2012-07-03 22:03:55
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