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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助 PMD 18T载体克隆转化详细不住
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elbo

金虫 (小有名气)

[求助] 求助 PMD 18T载体克隆转化详细不住 已有1人参与

目的片段200bp左右，根据宝生物说明书上貌似做不出来，请问前辈高人给予详细的实际操作步骤，不胜感激！
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1楼 2012-07-03 19:23:15
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第五平原

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-04 13:44:58
我们实验室的体系：
pMD 18T：1ul
目的DNA:4ul
Solution I: 5ul
总计：10ul的体系,16度过夜连接
赞一下 回复此楼
勤勉
4楼2012-07-03 22:03:55
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-04 13:44:44
给一个我们实验室常用的连接体系你吧：
pMD 18T：0.5ul
目的DNA:2.5ul
Solution I: 3ul
总计：6ul的体系
赞一下 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-07-03 21:07:31
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2012-07-03 21:07:31
给一个我们实验室常用的连接体系你吧：
pMD 18T：0.5ul
目的DNA:2.5ul
Solution I: 3ul
总计：6ul的体系

实际DNA：载体的比例要根据你DNA的浓度来确定，一般是3:1~10:1的范围.
赞一下 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
3楼2012-07-03 21:08:47
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你给的信息太不详细了，不知道是哪一步出得问题，感受态效率过低？PCR产物没加A？都是可能的问题。
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相信自己
5楼2012-07-04 08:50:46
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