应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 谁用过Fermentas的T4连接酶？
241/1返回列表
查看: 4581  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

da_da

金虫 (小有名气)

[交流] 谁用过Fermentas的T4连接酶？

谁用过Fermentas的T4连接酶啊？我连的是粘性末端，说明书上说22度10min中就行，我把时间延长到了2h，也连不上，怎么回事？大家都用的什么条件啊
注：目的片段和载体都切开了，感受态也没有问题。
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

huiee

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-05-17 10:07:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lillian菲

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们一般是室温过夜酶连，或者在37度2小时，你可以试试
赞一下 回复此楼
3楼2012-05-17 11:28:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

真心话

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
da_da: 金币+1 2012-05-17 18:56:27
我们都是16℃过夜连接，效果还是不错的。
赞一下 回复此楼
4楼2012-05-17 12:52:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

da_da

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 真心话 at 2012-05-17 12:52:26:
我们都是16℃过夜连接，效果还是不错的。

是fermentas的酶吗
赞一下 回复此楼
5楼2012-05-17 13:24:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

真心话

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by da_da at 2012-05-17 13:24:02:
是fermentas的酶吗

是的呀
回复此楼
6楼2012-05-17 13:29:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gywyl1977

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
链接体系有没有问题，调整一下。我们实验室是17度过夜连。
赞一下 回复此楼
7楼2012-05-17 14:01:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
da_da: 金币+1 2012-05-17 18:56:13
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-17 22:24:15
22 度 可以延长一点时间 10min也没有问题 我以前都是这么做的 可以延长2小时 酶量 20ul加0.2ul 如果连10min 20ul可以加2ul
赞一下 回复此楼
8楼2012-05-17 15:26:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huiee

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
da_da: 金币+1 2012-05-17 18:56:17
酶加过了反而不好，不能超过1u，or 不利于转换
赞一下 回复此楼
9楼2012-05-17 16:21:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

da_da

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by snzydong at 2012-05-17 15:26:48:
22 度 可以延长一点时间 10min也没有问题 我以前都是这么做的 可以延长2小时 酶量 20ul加0.2ul 如果连10min 20ul可以加2ul

是不是我的片段太大了啊，一个2500bp，一个1500bp，我用的都是20UL体系，加1.1ul酶，取10ul转化
赞一下 回复此楼
10楼2012-05-17 18:58:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

schkk

至尊木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以试试看大体系连接，22℃过液，然后再浓缩一下
赞一下 回复此楼
11楼2012-05-17 22:00:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heroyl

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
da_da: 金币+1 2012-05-18 14:19:18
我们做的时候是16度过夜的，个人感觉fermentas的确实挺不错的。
赞一下 回复此楼
12楼2012-05-18 12:58:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

东方龙飞

铜虫 (正式写手)
★
da_da: 金币+1 2012-05-19 18:20:20
16℃过夜连接
回复此楼
13楼2012-05-19 11:15:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白虾

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
da_da: 金币+1 2012-05-20 15:45:25
我一直都是22℃，连接16h，效果特别好，Fermentas的
赞一下 回复此楼
14楼2012-05-20 11:33:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+2, 鼓励交流经验哈 2012-05-20 18:43:24
10ul，太大不好，酶0.5
22度2-4h，保险点四度过夜～～～

连接还是小体积，娃哈哈～～～
做过0.5ul体系，那个效率一个字，高～～～
赞一下 回复此楼
15楼2012-05-20 17:14:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Icityman

铁虫 (小有名气)
16度连接过夜！
回复此楼
16楼2012-05-21 09:18:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiao9950

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
16℃过夜连接。确定vector和insert DNA都切开了吗？我前段时间做的，2600和1400的，开始连不上，后来发现有个酶要连续切22小时才行，再后来就连上了。
赞一下 回复此楼
17楼2012-05-21 16:20:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

早冰124

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我就在用，连接时连接上了，但是很奇怪连接的片段大小不太对劲，导致我筛菌筛了半个多月，我连接反应也是按照说明书来，22摄氏度，但是我延长到了25分钟
赞一下 回复此楼
18楼2012-05-21 16:46:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

looming

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
试试连接过夜吧，温度不变
赞一下 回复此楼
19楼2012-08-08 23:42:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
15楼: Originally posted by shaquila at 2012-05-20 17:14:53
10ul，太大不好，酶0.5
22度2-4h，保险点四度过夜～～～

连接还是小体积，娃哈哈～～～
做过0.5ul体系，那个效率一个字，高～～～

0.5微升怎么做?我的移液枪少到0.1微升就会粘在吸头打不出来,接触到液体,可能还会吸更多,所以我习惯最少加0.3微升.
赞一下 回复此楼
20楼2012-08-09 11:16:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
估计是片段比例不够，连接前先把两个片段跑个电泳看看浓度，再按照大小片段的摩尔比1:3加入，大片段加20ng足够了。20ul的体系连接酶加入0.5ul就行，22度1h就ok
赞一下 回复此楼
21楼2012-08-09 19:56:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

还重名啊

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问楼主 该公司的酶如何购得啊 谢谢
赞一下 回复此楼
22楼2014-10-05 09:38:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

da_da

金虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 还重名啊 at 2014-10-05 09:38:49
请问楼主 该公司的酶如何购得啊 谢谢

上他们公司的主页 上面有各个地区的销售联系电话
赞一下 回复此楼
23楼2014-10-14 09:30:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tocsy

捐助贵宾 (初入文坛)
引用回帖:
20楼: Originally posted by 547star at 2012-08-09 11:16:33
0.5微升怎么做?我的移液枪少到0.1微升就会粘在吸头打不出来,接触到液体,可能还会吸更多,所以我习惯最少加0.3微升....

就是，好假！
回复此楼
24楼2014-11-19 06:43:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
shihao6112楼
2012-05-17 10:33   回复  
相关版块跳转 我要订阅楼主 da_da 的主题更新
241/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0831生医工第一轮调剂失败求助 +12 小熊睿睿_s 2026-04-11 16/800 2026-04-12 16:28 by 钰璞
[考研] 296求调剂 +14 汪！？！ 2026-04-10 16/800 2026-04-12 10:48 by zhouyuwinner
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +12 振—TZ 2026-04-10 12/600 2026-04-12 07:54 by wj165256
[考研] 332求调剂 +14 蕉蕉123 2026-04-10 14/700 2026-04-12 00:27 by 蓝云思雨
[考研] 调剂求助 +6 果然有我 2026-04-11 7/350 2026-04-11 16:22 by 明月此时有
[考研] 中药学调剂 初试324 +4 洋甘菊、 2026-04-10 6/300 2026-04-11 09:41 by gong120082
[考研] 302分求调剂 +9 凡语祈愿 2026-04-08 10/500 2026-04-10 23:26 by 314126402
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +4 加大号饭盒袋 2026-04-10 4/200 2026-04-10 20:52 by gong120082
[考研] 085404 298分求调剂 +10 呼啦呼啦呼呼呼 2026-04-10 11/550 2026-04-10 16:44 by wangy0907
[考研] 一志愿华东师范生物学326分，求调剂 +8 刘墨墨 2026-04-09 8/400 2026-04-10 12:00 by pengliang8036
[考研] 机械还有还有名额吗？太难了 +6 笑笑袁 2026-04-10 6/300 2026-04-10 11:54 by 高维春
[考研] 材料299专硕求调剂 +10 +21 2026-04-09 10/500 2026-04-09 17:34 by 1753564080
[考研] 一志愿华南师范大学0702物理学305调剂 +4 念常安 2026-04-07 6/300 2026-04-08 22:53 by bljnqdcc
[考研] 0703化学调剂 348分 +14 唉我超真没招了 2026-04-06 15/750 2026-04-08 19:16 by 我减肥1
[考研] 一志愿华东理工085601材料工程303分求调剂 +15 a1708 2026-04-06 15/750 2026-04-08 16:23 by luoyongfeng
[考研] 263分B区求调剂 +6 李nihao 2026-04-08 6/300 2026-04-08 09:38 by 南开小綦
[考研] 313求调剂 +3 十六拾陆 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:20 by lbsjt
[考研] 338求调剂 +5 小猪红色 678 2026-04-06 6/300 2026-04-07 21:18 by 乔哒哒哒
[考研] 本科生物信息学，总分362 求07 08调剂 +6 q小倩1210 2026-04-06 6/300 2026-04-07 19:40 by macy2011
[考研] 085100建筑学 寻求跨专业调剂 一志愿南大294分 校级省级国家级奖项若干 踏实肯干 +3 1021075758 2026-04-06 4/200 2026-04-07 09:23 by 蓝云思雨
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭