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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » Promega公司T4连接酶的连接体系
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mili19910725

新虫 (初入文坛)

[求助] Promega公司T4连接酶的连接体系 已有1人参与

第一次用Promega公司的T4连接酶，有木有人用过这个酶连接成功的，那你的酶切体系又是什么呢？求助，感激不尽。
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1楼 2014-09-23 10:05:42
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zero19871029

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
很好用，我们实验室一直用的他们家的，体系也很简单，看一下他们的说明书，上面写的很详细
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2楼2014-09-23 12:40:55
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mili19910725

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by zero19871029 at 2014-09-23 12:40:55
很好用，我们实验室一直用的他们家的，体系也很简单，看一下他们的说明书，上面写的很详细

说明书上的那个写的载体DNA100ng,插入的DNA17ng,缓冲液1uL，连接酶0.1-10uL，那个ng是怎么换算呀，还有那个连接酶加入多少合适，能不能把你做实验的体系告诉我，我就可以参考一下了~
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3楼2014-09-23 15:00:37
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zero19871029

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mili19910725 at 2014-09-23 15:00:37
说明书上的那个写的载体DNA100ng,插入的DNA17ng,缓冲液1uL，连接酶0.1-10uL，那个ng是怎么换算呀，还有那个连接酶加入多少合适，能不能把你做实验的体系告诉我，我就可以参考一下了~...

如果你没有测浓度的话可以试一下这个体系
10μl体系：2μl质粒，6μlDNA，1μlbuffer，1μl酶，4度连接过夜，或者16度连几个小时
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4楼2014-09-24 11:19:25
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mili19910725

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zero19871029 at 2014-09-24 11:19:25
如果你没有测浓度的话可以试一下这个体系
10μl体系：2μl质粒，6μlDNA，1μlbuffer，1μl酶，4度连接过夜，或者16度连几个小时...

非常感谢~~~
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5楼2014-09-24 19:48:17
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