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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 谁用过Fermentas的T4连接酶？
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da_da

金虫 (小有名气)

[交流] 谁用过Fermentas的T4连接酶？

谁用过Fermentas的T4连接酶啊？我连的是粘性末端，说明书上说22度10min中就行，我把时间延长到了2h，也连不上，怎么回事？大家都用的什么条件啊
注：目的片段和载体都切开了，感受态也没有问题。
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huiee

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1楼 2012-05-17 10:07:37
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lillian菲

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们一般是室温过夜酶连，或者在37度2小时，你可以试试
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3楼2012-05-17 11:28:22
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真心话

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
da_da: 金币+1 2012-05-17 18:56:27
我们都是16℃过夜连接，效果还是不错的。
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4楼2012-05-17 12:52:26
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da_da

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 真心话 at 2012-05-17 12:52:26:
我们都是16℃过夜连接，效果还是不错的。

是fermentas的酶吗
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5楼2012-05-17 13:24:02
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真心话

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by da_da at 2012-05-17 13:24:02:
是fermentas的酶吗

是的呀
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6楼2012-05-17 13:29:59
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gywyl1977

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
链接体系有没有问题，调整一下。我们实验室是17度过夜连。
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7楼2012-05-17 14:01:06
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
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da_da: 金币+1 2012-05-17 18:56:13
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-17 22:24:15
22 度 可以延长一点时间 10min也没有问题 我以前都是这么做的 可以延长2小时 酶量 20ul加0.2ul 如果连10min 20ul可以加2ul
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8楼2012-05-17 15:26:48
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huiee

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
da_da: 金币+1 2012-05-17 18:56:17
酶加过了反而不好，不能超过1u，or 不利于转换
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9楼2012-05-17 16:21:47
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da_da

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by snzydong at 2012-05-17 15:26:48:
22 度 可以延长一点时间 10min也没有问题 我以前都是这么做的 可以延长2小时 酶量 20ul加0.2ul 如果连10min 20ul可以加2ul

是不是我的片段太大了啊，一个2500bp，一个1500bp，我用的都是20UL体系，加1.1ul酶，取10ul转化
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10楼2012-05-17 18:58:06
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schkk

至尊木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以试试看大体系连接，22℃过液，然后再浓缩一下
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11楼2012-05-17 22:00:43
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heroyl

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
da_da: 金币+1 2012-05-18 14:19:18
我们做的时候是16度过夜的，个人感觉fermentas的确实挺不错的。
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12楼2012-05-18 12:58:55
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东方龙飞

铜虫 (正式写手)
★
da_da: 金币+1 2012-05-19 18:20:20
16℃过夜连接
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13楼2012-05-19 11:15:00
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小白虾

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
da_da: 金币+1 2012-05-20 15:45:25
我一直都是22℃，连接16h，效果特别好，Fermentas的
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14楼2012-05-20 11:33:22
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shaquila

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
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西瓜: 金币+2, 鼓励交流经验哈 2012-05-20 18:43:24
10ul，太大不好，酶0.5
22度2-4h，保险点四度过夜～～～

连接还是小体积，娃哈哈～～～
做过0.5ul体系，那个效率一个字，高～～～
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15楼2012-05-20 17:14:53
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Icityman

铁虫 (小有名气)
16度连接过夜！
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16楼2012-05-21 09:18:19
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qiao9950

金虫 (小有名气)
★
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16℃过夜连接。确定vector和insert DNA都切开了吗？我前段时间做的，2600和1400的，开始连不上，后来发现有个酶要连续切22小时才行，再后来就连上了。
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17楼2012-05-21 16:20:20
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早冰124

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我就在用，连接时连接上了，但是很奇怪连接的片段大小不太对劲，导致我筛菌筛了半个多月，我连接反应也是按照说明书来，22摄氏度，但是我延长到了25分钟
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18楼2012-05-21 16:46:52
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looming

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
试试连接过夜吧，温度不变
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19楼2012-08-08 23:42:30
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547star

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
15楼: Originally posted by shaquila at 2012-05-20 17:14:53
10ul，太大不好，酶0.5
22度2-4h，保险点四度过夜～～～

连接还是小体积，娃哈哈～～～
做过0.5ul体系，那个效率一个字，高～～～

0.5微升怎么做?我的移液枪少到0.1微升就会粘在吸头打不出来,接触到液体,可能还会吸更多,所以我习惯最少加0.3微升.
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20楼2012-08-09 11:16:33
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huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)
★
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估计是片段比例不够，连接前先把两个片段跑个电泳看看浓度，再按照大小片段的摩尔比1:3加入，大片段加20ng足够了。20ul的体系连接酶加入0.5ul就行，22度1h就ok
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21楼2012-08-09 19:56:28
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还重名啊

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问楼主 该公司的酶如何购得啊 谢谢
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22楼2014-10-05 09:38:49
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da_da

金虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 还重名啊 at 2014-10-05 09:38:49
请问楼主 该公司的酶如何购得啊 谢谢

上他们公司的主页 上面有各个地区的销售联系电话
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23楼2014-10-14 09:30:06
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tocsy

捐助贵宾 (初入文坛)
引用回帖:
20楼: Originally posted by 547star at 2012-08-09 11:16:33
0.5微升怎么做?我的移液枪少到0.1微升就会粘在吸头打不出来,接触到液体,可能还会吸更多,所以我习惯最少加0.3微升....

就是，好假！
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24楼2014-11-19 06:43:13
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shihao6112楼
2012-05-17 10:33   回复  
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