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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】T4酶连体系
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】T4酶连体系

TAKARA的T4连接酶说明书上是25ul体系，有的人又说酶连体系越小效率越高，各位通常的酶连体系是多大啊？体系的组成呢？谢谢~~
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1楼 2011-04-01 14:21:50
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susizheng

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-04-01 19:57:59
体系我一般用10或者20 uL（有点多哦）
除了酶和buffer体积固定，片段和载体根据浓度来分配。
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2楼2011-04-01 14:29:01
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-04-01 14:29:01:
体系我一般用10或者20 uL（有点多哦）
除了酶和buffer体积固定，片段和载体根据浓度来分配。

不错，是这样
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3楼2011-04-01 14:53:36
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shaquila

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+6): good 2011-04-02 12:33:58
越小碰撞几率越大嘛，相同浓度条件下，另：宝生物这个连接酶做粘端还行，说明书也没说平端要怎么做。我买过FERMENTAS的做过比较，它上面说酶用量加五倍，各种连接按照推荐体系，一下就连上了。后来也用粘端做过对比，宝生物的克隆只有不到的人家的三分一，效率不怎么样阿…
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4楼2011-04-02 08:50:54
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hyde0706

木虫 (正式写手)
★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-06 14:03:41
体积小并不是碰撞几率大吧？这个应该是和浓度相关的。体积小，所以连接的片段浓度也高。
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5楼2011-04-02 16:49:42
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shaquila

金虫 (正式写手)
相同浓度下…
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6楼2011-04-02 18:34:39
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
1949stone(金币+4): 个人经验 鼓励 2011-04-06 14:04:19
大体系酶切，小体系连接，10ul连接体系，0.5ul载体，加大目的片段浓度，我们通常用这个体系，挺好用的！
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7楼2011-04-03 09:11:48
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dreaming0816

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
1949stone(金币+3): 不错 2011-04-06 14:04:30
我们一般用10微升，如果连得上就能上，10微升足够了；如果连不上再多也无益。
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8楼2011-04-03 17:08:44
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taigongzaici

新虫 (小有名气)
三个字母-----------
N
E
B
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9楼2011-04-04 22:20:31
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yangtianyuan

铜虫 (小有名气)
一般是10微升体系
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10楼2011-04-04 23:21:20
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)
★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-06 14:04:47
NEB的酶我也在用,效率和宝生物的差不多啊
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11楼2011-04-05 17:32:55
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sai00fuji

金虫 (正式写手)
我用10ul的体系。载体1ul
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12楼2011-04-05 22:26:51
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wangsibing1987

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-04-06 08:10:48
1949stone(金币+2): 不错 2011-04-06 14:04:59
载体：产物：连接酶=4:1:5  10ul
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13楼2011-04-05 23:30:11
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
1949stone(金币+3): 细致 鼓励 2011-04-06 14:05:18
要看是连接啥末端啥样本吧，不同的如果是一端是平的一端是突出的小一点的体系是有好处的，打NEB的400电话吧，他们会说的详细一些。呵呵，就说你用的是他们的酶，他们回答问题还是很耐心的。
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14楼2011-04-06 12:59:31
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wangsibing1987 at 2011-04-05 23:30:11:
载体：产物：连接酶=4:1:5  10ul

哥们是不是顺序有点不对啊
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15楼2011-04-07 10:14:09
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wangsibing1987

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by xiaoyu1014126 at 2011-04-07 10:14:09:
哥们是不是顺序有点不对啊

呵呵，反了，不好意思啊
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16楼2011-04-07 10:52:06
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傻子

木虫 (正式写手)
用过10ul的居多，现在用的是5ul的快速连接，效果也好
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17楼2011-04-07 10:56:13
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piggpi

金虫 (小有名气)
10µl体系，目的片段：载体==3：1，我一般是这样做的，
效果说来应该都还可以。。。。
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18楼2011-04-07 11:58:04
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