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1397717

新虫 (初入文坛)

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[求助] PCR程序设置

现在在做一个PCR扩增实验，引物和DNA都有，请问如何设置PCR程序？
Tm值在引物设计的时候已经确定了，扩增片段大小分别为431bp和671bp，那延伸时间和循环次数如何确定？谢谢！

[ Last edited by 1397717 on 2012-3-5 at 14:26 ]

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1楼2012-03-05 14:22:53

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纸船

铜虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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1397717(金币+5): ★★★很有帮助 2012-03-06 09:58:19
1397717(金币+5): ★★★很有帮助 2012-03-06 09:59:24

退火温度跟理论Tm值是有差别的，建议做下梯度PCR，你这么长的片段，延伸30S足够了，循环次数建议30-35.