24小时热门版块排行榜    

查看: 4193  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

13808906306

金虫 (正式写手)

[求助] PCR引物的量如何确定,求助高手指教 已有1人参与

最近做PCR发现一个问题,一些资料上说PCR体系中引物的量要稍大于模板的量,可是在PCR过程中引物不断被消耗,我计算了下十几二十几个循环后引物明显不够啊,比如我做的PCR  50ul 体系:引物1、2各为25 pmol ,模板量4 pmol ,我的是倍数扩增,按我的做法不到四个循,引物环就消耗干净了。可是我在实际操作中发现,PCR在第二十五、六个循环才出条带,这是为什么啊。求高人指点
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

13808906306

金虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 海阔天空8158 at 2012-02-24 08:26:25:
这个问题与算法无关。
楼主,你的算法可能没错,但是,你忽略一个重要问题:你的DNA都是你的目的产物吗?肯定有许多其他无关序列的。
因此,计算没有丝毫意义。这也是平常做PCR的时候根本不会计算的原因。

即 ...

这位说的有道理,但是我把PCR产物跑非变性PAGE凝胶发现确实是只有一条带,就算有杂的DNA相信亮也是很少的,所以我还是纠结我的问题,能给解答我的原始问题吗?
10楼2012-02-24 15:34:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

13808906306

金虫 (正式写手)

坐等高人指点
2楼2012-02-23 15:40:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
模板量4 pmol 这个说法你是不是误解了?
假设模板为400bp的DNA片段1ng/ul,使用1ul作模板。在100ul体系中,
则模板量为0.01ng/ul换算出来即为0.037nM(而1nM=0.001pmol/ul,0.037nM=0.000037pmol/ul)
而引物为10pmol/ul使用1ul加到100的体系里也有0.1pmol/ul>>0.000037pmol/ul
伟大航线....
3楼2012-02-23 16:36:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

13808906306

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by longrna at 2012-02-23 16:36:33:
模板量4 pmol 这个说法你是不是误解了?
假设模板为400bp的DNA片段1ng/ul,使用1ul作模板。在100ul体系中,
则模板量为0.01ng/ul换算出来即为0.037nM(而1nM=0.001pmol/ul,0.037nM=0.000037pmol/ul)
而引物为1 ...

木有误解啊,我是用紫外分光光度计测的浓度:14ug/ml ,片段长度为77bp(算出来大概就是0.56pmol/ul),然后取7ul做模板,差不多就是4pmol啊,然后引物是10uM的,也就是10pmol/ul,取2.5ul加入到50ul体系,也就是25pmol了
4楼2012-02-23 16:50:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 13/650 2026-03-20 21:01 by 无际的草原
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +19 不知道叫什么! 2026-03-15 21/1050 2026-03-20 20:48 by zhukairuo
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +22 rare12345 2026-03-18 22/1100 2026-03-20 20:39 by zhukairuo
[考研] 0703化学调剂 ,六级已过,有科研经历 +13 曦熙兮 2026-03-15 13/650 2026-03-20 19:35 by Dream007008
[考研] 261求B区调剂,科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 346求调剂[0856] +3 WayneLim327 2026-03-16 6/300 2026-03-19 11:21 by WayneLim327
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +7 小材化本科 2026-03-18 7/350 2026-03-19 10:46 by Linda Hu
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 330求调剂 +3 小材化本科 2026-03-18 3/150 2026-03-18 21:55 by 无懈可击111
[考研] 材料专业求调剂 +5 hanamiko 2026-03-18 5/250 2026-03-18 20:19 by 星空星月
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 085601专硕,总分342求调剂,地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 297求调剂 +8 戏精丹丹丹 2026-03-17 8/400 2026-03-18 14:30 by laoshidan
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考博] 26申博 +4 八6八68 2026-03-16 4/200 2026-03-17 13:00 by 轻松不少随
[考研] 机械专硕325,寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 080500,材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
信息提示
请填处理意见