应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR引物的量如何确定，求助高手指教
51/1返回列表
查看: 4157  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

13808906306

金虫 (正式写手)

[求助] PCR引物的量如何确定，求助高手指教 已有1人参与

最近做PCR发现一个问题，一些资料上说PCR体系中引物的量要稍大于模板的量，可是在PCR过程中引物不断被消耗，我计算了下十几二十几个循环后引物明显不够啊，比如我做的PCR  50ul 体系：引物1、2各为25 pmol ，模板量4 pmol ，我的是倍数扩增，按我的做法不到四个循，引物环就消耗干净了。可是我在实际操作中发现，PCR在第二十五、六个循环才出条带，这是为什么啊。求高人指点
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-02-23 15:37:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

13808906306

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by longrna at 2012-02-23 16:36:33:
模板量4 pmol 这个说法你是不是误解了？
假设模板为400bp的DNA片段1ng/ul，使用1ul作模板。在100ul体系中，
则模板量为0.01ng/ul换算出来即为0.037nM(而1nM=0.001pmol/ul，0.037nM=0.000037pmol/ul)
而引物为1 ...

木有误解啊，我是用紫外分光光度计测的浓度：14ug/ml ，片段长度为77bp（算出来大概就是0.56pmol/ul），然后取7ul做模板，差不多就是4pmol啊，然后引物是10uM的，也就是10pmol/ul，取2.5ul加入到50ul体系，也就是25pmol了
赞一下 回复此楼
4楼2012-02-23 16:50:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

13808906306

金虫 (正式写手)
坐等高人指点
回复此楼
2楼2012-02-23 15:40:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
模板量4 pmol 这个说法你是不是误解了？
假设模板为400bp的DNA片段1ng/ul，使用1ul作模板。在100ul体系中，
则模板量为0.01ng/ul换算出来即为0.037nM(而1nM=0.001pmol/ul，0.037nM=0.000037pmol/ul)
而引物为10pmol/ul使用1ul加到100的体系里也有0.1pmol/ul>>0.000037pmol/ul
赞一下 回复此楼
伟大航线....
3楼2012-02-23 16:36:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你算法有误吧
7ul模板（模板太多了）=7ul*14ng/ul=98ng 加入50ul体系 98ng/50ul=1.96ng/ul(算2ng/ul)
2ng/ul的 77bp DNA你怎么算成4pmol? 应该是40nM(即0.04pmol/ul，而不是4pmol)
赞一下 回复此楼
伟大航线....
5楼2012-02-23 16:59:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +8 一鸭鸭哟 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:35 by 沐霖12138
[考研] 一志愿华中师范071000，325求调剂 +6 RuitingC 2026-03-12 6/300 2026-03-16 14:50 by 可淡不可忘
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 调剂 +3 13853210211 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:47 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +5 牛乳糖的卡卡 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:05 by JourneyLucky
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +3 zjy101327 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:48 by JourneyLucky
[考研] ［0860］321分求调剂，ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕350 求调剂 +4 王金科 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:02 by ruiyingmiao
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考研] 研究生招生 +3 徐海涛11 2026-03-10 7/350 2026-03-12 14:26 by 徐海涛11
[考研] 085600 材料与化工 295 求调剂 +10 dream…… 2026-03-10 12/600 2026-03-12 13:46 by dream……
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭