24小时热门版块排行榜    

查看: 4158  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

13808906306

金虫 (正式写手)

[求助] PCR引物的量如何确定,求助高手指教 已有1人参与

最近做PCR发现一个问题,一些资料上说PCR体系中引物的量要稍大于模板的量,可是在PCR过程中引物不断被消耗,我计算了下十几二十几个循环后引物明显不够啊,比如我做的PCR  50ul 体系:引物1、2各为25 pmol ,模板量4 pmol ,我的是倍数扩增,按我的做法不到四个循,引物环就消耗干净了。可是我在实际操作中发现,PCR在第二十五、六个循环才出条带,这是为什么啊。求高人指点
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
模板量4 pmol 这个说法你是不是误解了?
假设模板为400bp的DNA片段1ng/ul,使用1ul作模板。在100ul体系中,
则模板量为0.01ng/ul换算出来即为0.037nM(而1nM=0.001pmol/ul,0.037nM=0.000037pmol/ul)
而引物为10pmol/ul使用1ul加到100的体系里也有0.1pmol/ul>>0.000037pmol/ul
伟大航线....
3楼2012-02-23 16:36:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

13808906306

金虫 (正式写手)

坐等高人指点
2楼2012-02-23 15:40:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

13808906306

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by longrna at 2012-02-23 16:36:33:
模板量4 pmol 这个说法你是不是误解了?
假设模板为400bp的DNA片段1ng/ul,使用1ul作模板。在100ul体系中,
则模板量为0.01ng/ul换算出来即为0.037nM(而1nM=0.001pmol/ul,0.037nM=0.000037pmol/ul)
而引物为1 ...

木有误解啊,我是用紫外分光光度计测的浓度:14ug/ml ,片段长度为77bp(算出来大概就是0.56pmol/ul),然后取7ul做模板,差不多就是4pmol啊,然后引物是10uM的,也就是10pmol/ul,取2.5ul加入到50ul体系,也就是25pmol了
4楼2012-02-23 16:50:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你算法有误吧
7ul模板(模板太多了)=7ul*14ng/ul=98ng 加入50ul体系 98ng/50ul=1.96ng/ul(算2ng/ul)
2ng/ul的 77bp DNA你怎么算成4pmol? 应该是40nM(即0.04pmol/ul,而不是4pmol)
伟大航线....
5楼2012-02-23 16:59:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学336分求调剂 +3 zbzihdhd 2026-03-15 4/200 2026-03-16 23:52 by zbzihdhd
[考研] 211本,11408一志愿中科院277分,曾在中科院自动化所实习 +3 Losir 2026-03-12 4/200 2026-03-16 21:52 by Losir
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy! 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 材料工程,326分,求调剂 +6 KRSLSR 2026-03-10 6/300 2026-03-13 23:47 by JourneyLucky
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中科院,化学方向,295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 求调剂(材料与化工327) +4 爱吃香菜啦 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:11 by JourneyLucky
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] 工科,求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +3 Zz版 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:36 by 18595523086
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 材料专硕350 求调剂 +4 王金科 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:02 by ruiyingmiao
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 工科0856专硕化学工程269能调剂吗 +10 我想读研11 2026-03-10 10/500 2026-03-13 10:14 by Yuyi.
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
[考研] 研究生招生 +3 徐海涛11 2026-03-10 7/350 2026-03-12 14:26 by 徐海涛11
[考研] 求调剂材料专硕293 +6 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 6/300 2026-03-10 18:22 by ms629
信息提示
请填处理意见