24小时热门版块排行榜    

查看: 2537  |  回复: 5

karin

木虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌表达蛋白提取总不成功,求助高手指教!

基因克隆后在大肠杆菌中以包涵体形式大量表达,想提取包涵体蛋白。一般用超声方法破碎细胞,再用2M、8M尿素洗涤包涵体后,蛋白就大部分溶解在8M尿素溶液中。但本人先是超声处理,再是加溶菌酶同时超声,结果都不理想,8M尿素溶液中蛋白量很低,大部分蛋白还是在沉淀中。超声时间由短到长也都试了。求高手帮忙啊!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

坚持就是胜利
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangwq

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助哦 2012-02-18 08:22:54
karin(金币+3): ★★★很有帮助 2012-02-18 08:29:10
看你想做什么后续实验了,建议你换标签。一般来说用MBP标签可以帮助蛋白处于溶解状体,而且MBP融合蛋白表达超高,很容易纯化。问题是MBP标签太大有可能影响蛋白活性。GST标签也不错,也能帮助蛋白溶解,效果不如MBP好。可以尝试18度3-6小时甚至4度过夜诱导,蛋白慢慢表达会增加溶解性。一般来说用变性条件从包涵体中纯化蛋白是最后的选择。之前应该尝试各种办法让蛋白可溶表达
2楼2012-02-17 22:48:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

karin

木虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by tangwq at 2012-02-17 22:48:51:
看你想做什么后续实验了,建议你换标签。一般来说用MBP标签可以帮助蛋白处于溶解状体,而且MBP融合蛋白表达超高,很容易纯化。问题是MBP标签太大有可能影响蛋白活性。GST标签也不错,也能帮助蛋白溶解,效果不如M ...

很有帮助,谢谢!
坚持就是胜利
3楼2012-02-18 08:30:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jacky1985310

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


karin: 金币+1, 有帮助 2012-06-28 08:18:29
如果获得蛋白后想要做pulldown或其他活性检测的话最好不用尿素等变性剂,那样会涉及到复性之后活性是否回复的问题,还是要摸很多条件。
莫不如把精力花在蛋白表达上,争取使其可溶是最好的选择
二楼的建议很专业,早看到这个MBP的建议我就不用自己挣扎那么久才换这个标签了。。。不过全当是练手了
4楼2012-06-27 19:07:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sk_yb

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


karin: 金币+1, 有帮助, 谢啦 2012-06-28 08:19:01
纯包涵体不是个简单的事,有时纯出来也没有活性。建议更换载体,或直接换标签。再摸索一下最优条件
5楼2012-06-27 20:59:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuehan1996

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by karin at 2012-02-18 08:30:00
很有帮助,谢谢!...

请教,什么载体有mbp标签啊!谢谢
6楼2014-08-24 15:06:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 karin 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 085600材料与化工 326 求调剂 +5 热爱生活ing 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:39 by JourneyLucky
[考研] 306求调剂 +4 唐薏薏 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:19 by JourneyLucky
[考研] 调剂 +3 13853210211 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:47 by JourneyLucky
[考研] 26考研调剂 +3 ying123. 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:18 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 0805,333求调剂 +3 112253525 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:42 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 资源与环境 285 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:31 by houyaoxu
[考研] 一志愿河海大学085900土木水利专硕279求调剂不挑专业 +4 SunWwWwWw 2026-03-10 8/400 2026-03-13 02:23 by SunWwWwWw
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 求调剂材料专硕293 +6 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 6/300 2026-03-10 18:22 by ms629
信息提示
请填处理意见