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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：哪些类蛋白在大肠杆菌中不好表达？
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325865959

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助：哪些类蛋白在大肠杆菌中不好表达？

哪些类蛋白在大肠杆菌中，即使不长，表达载体正常，优化密码子后仍然不好表达？都有哪些原因？
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1楼 2013-05-14 16:28:38
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peng5053

银虫 (正式写手)

Dr.

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-05-15 03:16:00
我曾经遇到过一种蛋白，与你所描述的情况相似。这类蛋白表达后可能会导致大肠杆菌致死。
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多点思维，多点idea
2楼2013-05-14 20:51:30
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roomofxw

木虫 (正式写手)
★
325865959(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-21 08:19:31
太多了，看综述，一个做结构的中心，试了一万五个构建，表达出来才6千，可溶的不到两千
不过通常加个大的tag，有希望获得表达。
如果对细菌有毒的话，试试提高到42度，变成包涵体试一试
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3楼2013-05-15 11:53:57
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jiangyhai

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by roomofxw at 2013-05-15 11:53:57
太多了，看综述，一个做结构的中心，试了一万五个构建，表达出来才6千，可溶的不到两千
不过通常加个大的tag，有希望获得表达。
如果对细菌有毒的话，试试提高到42度，变成包涵体试一试

请问下这边综述是什么？谢谢！
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静心做事。
4楼2013-05-15 16:50:43
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roomofxw

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
325865959(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-21 08:19:40
文献找不到了
数据应该来自这个中心
http://www.secsg.org/cgi-bin/report.pl
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5楼2013-05-15 17:27:03
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
325865959(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-21 08:19:51
325865959: 金币+1, ★有帮助 2013-05-21 15:51:45
这类蛋白是膜蛋白的可能性比较大！！膜蛋白对E.coli具有致死的作用！所以蛋白表达甚微！！！
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长得比我英俊的，没我有才华！有才华的，没我长得俊！
6楼2013-05-15 18:30:07
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325865959

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by roomofxw at 2013-05-15 17:27:03
文献找不到了
数据应该来自这个中心
http://www.secsg.org/cgi-bin/report.pl

The Southeast Collaboratory for Structural Genomics,这个机构的确规模浩大技术先进啊，就是不知道他们做那么大规模异源表达的时候有没有优化密码子……
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7楼2013-05-16 10:21:23
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roomofxw

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 325865959 at 2013-05-16 10:21:23
The Southeast Collaboratory for Structural Genomics,这个机构的确规模浩大技术先进啊，就是不知道他们做那么大规模异源表达的时候有没有优化密码子……...

根据我表达几百个蛋白的一点经验，密码子优化，在表达量低的情况下，有作用提高。但是遇到一点点都不表达的时候，很多时候不管用。当然，应该是我的优化经验不足，只是用软件一搞完事，求指导。
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8楼2013-05-16 10:39:51
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325865959

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by roomofxw at 2013-05-16 10:39:51
根据我表达几百个蛋白的一点经验，密码子优化，在表达量低的情况下，有作用提高。但是遇到一点点都不表达的时候，很多时候不管用。当然，应该是我的优化经验不足，只是用软件一搞完事，求指导。...

额，你遇到的一点都不表达的蛋白有哪些？对于这些蛋白，Parallel on-chip gene synthesis and application to optimization of protein expression，这篇文章中提到的方法会不会有用？直接跳过软件设计，用芯片合成DNA文库，连载体，大规模转化，然后挑选阳性转化子。
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9楼2013-05-16 11:04:39
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roomofxw

木虫 (正式写手)
★
325865959(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-21 08:20:46
额，如果稀有密码子的话，换个稀有密码子菌株就好了。如果有毒的话，试试表达毒性蛋白的菌株。
作为公司，不会采用这么成本高的方法的
个人觉得，除了个别蛋白，更有效的方法应该换不同的标签或者载体就好了。
Nus，MBP,GST,TRX……
pET,pQE,pBAD,pTric……
rosetta,PLYSE,C43……
有时候也不见得不表达，可能量太少SDS看不到，或者位置偏离的较远被忽略了。
先加个His，用抗体看看情况吧。除非有文献明确指出是基因序列的问题。
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10楼2013-05-16 13:10:14
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