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325865959

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助：哪些类蛋白在大肠杆菌中不好表达？

哪些类蛋白在大肠杆菌中，即使不长，表达载体正常，优化密码子后仍然不好表达？都有哪些原因？
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1楼2013-05-14 16:28:38
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325865959

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by roomofxw at 2013-05-16 10:39:51
根据我表达几百个蛋白的一点经验，密码子优化，在表达量低的情况下，有作用提高。但是遇到一点点都不表达的时候，很多时候不管用。当然，应该是我的优化经验不足，只是用软件一搞完事，求指导。...

额，你遇到的一点都不表达的蛋白有哪些？对于这些蛋白，Parallel on-chip gene synthesis and application to optimization of protein expression，这篇文章中提到的方法会不会有用？直接跳过软件设计，用芯片合成DNA文库，连载体，大规模转化，然后挑选阳性转化子。
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9楼2013-05-16 11:04:39
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peng5053

银虫 (正式写手)

Dr.

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-05-15 03:16:00
我曾经遇到过一种蛋白，与你所描述的情况相似。这类蛋白表达后可能会导致大肠杆菌致死。
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多点思维，多点idea
2楼2013-05-14 20:51:30
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roomofxw

木虫 (正式写手)
★
325865959(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-21 08:19:31
太多了，看综述，一个做结构的中心，试了一万五个构建，表达出来才6千，可溶的不到两千
不过通常加个大的tag，有希望获得表达。
如果对细菌有毒的话，试试提高到42度，变成包涵体试一试
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3楼2013-05-15 11:53:57
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jiangyhai

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by roomofxw at 2013-05-15 11:53:57
太多了，看综述，一个做结构的中心，试了一万五个构建，表达出来才6千，可溶的不到两千
不过通常加个大的tag，有希望获得表达。
如果对细菌有毒的话，试试提高到42度，变成包涵体试一试

请问下这边综述是什么？谢谢！
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静心做事。
4楼2013-05-15 16:50:43
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