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最近用HB2151表达遇到以下情况，恳请高手指教
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我最近使用HB2151大肠杆菌表达，遇到了以下狗血情况，急死人了 1. 转化效率极低。我已经重复做感受态几次了，我也做了几年实验，做感受态是非常熟练了，可是每次做好的感受态转化，全部转化子涂了也就只有10-20 个克隆。 2. 挑克隆提质粒，绝大部分的克隆提出的质粒是拷贝很低的。很淡很淡的一条带，都没法酶切鉴定，就能PCR鉴定了，也没有办法测序，浓度实在太低了，运气好的时候可能有一两个克隆提出的质粒是能用的吧。 3. 诱导表达的时候，只要加入IPTG，菌的生长会明显的被抑制，甚至澄清。我尝试的降低IPTG的浓度，0.2mM, 0.4mM, 0.6mM, 0.8mM, 情况都差不多，如果使用1mM, 那就会变澄清了。 请教各位大侠，这到底是怎么回事啊？？ 备注：我们实验室保存的HB2151 是08年冻存的，直到最近才拿出来使用，有没可能长时间冻存，菌出问题了？ [ Last edited by 1949stone on 2012-8-14 at 18:29 ] |
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2楼2012-08-09 17:24:02
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