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luckydong1

铜虫 (小有名气)


[交流] 最近用HB2151表达遇到以下情况,恳请高手指教

我最近使用HB2151大肠杆菌表达,遇到了以下狗血情况,急死人了
1. 转化效率极低。我已经重复做感受态几次了,我也做了几年实验,做感受态是非常熟练了,可是每次做好的感受态转化,全部转化子涂了也就只有10-20 个克隆。
2. 挑克隆提质粒,绝大部分的克隆提出的质粒是拷贝很低的。很淡很淡的一条带,都没法酶切鉴定,就能PCR鉴定了,也没有办法测序,浓度实在太低了,运气好的时候可能有一两个克隆提出的质粒是能用的吧。
3. 诱导表达的时候,只要加入IPTG,菌的生长会明显的被抑制,甚至澄清。我尝试的降低IPTG的浓度,0.2mM, 0.4mM, 0.6mM, 0.8mM, 情况都差不多,如果使用1mM, 那就会变澄清了。
请教各位大侠,这到底是怎么回事啊??
备注:我们实验室保存的HB2151 是08年冻存的,直到最近才拿出来使用,有没可能长时间冻存,菌出问题了?

[ Last edited by 1949stone on 2012-8-14 at 18:29 ]
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damaomao

禁虫 (正式写手)


luckydong1(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽

3楼2012-08-11 09:18:49
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luckydong1

铜虫 (小有名气)


木有人???高手们请帮帮忙啊
2楼2012-08-09 17:24:02
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luckydong1

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
3楼: Originally posted by damaomao at 2012-08-11 09:18:49
菌用之前做过纯化吗

有啊,划了线,挑的单菌落
4楼2012-08-14 15:27:36
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woshizhufeng

新虫 (小有名气)



luckydong1(金币+1): 谢谢参与
时间长了,会对菌的活性有影响的。以前师兄保存的菌种,前几天做了活化,居然没有长出来的。
6楼2012-08-14 17:48:57
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