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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 最近用HB2151表达遇到以下情况，恳请高手指教
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luckydong1

铜虫 (小有名气)

[交流] 最近用HB2151表达遇到以下情况，恳请高手指教

我最近使用HB2151大肠杆菌表达，遇到了以下狗血情况，急死人了
1. 转化效率极低。我已经重复做感受态几次了，我也做了几年实验，做感受态是非常熟练了，可是每次做好的感受态转化，全部转化子涂了也就只有10-20 个克隆。
2. 挑克隆提质粒，绝大部分的克隆提出的质粒是拷贝很低的。很淡很淡的一条带，都没法酶切鉴定，就能PCR鉴定了，也没有办法测序，浓度实在太低了，运气好的时候可能有一两个克隆提出的质粒是能用的吧。
3. 诱导表达的时候，只要加入IPTG，菌的生长会明显的被抑制，甚至澄清。我尝试的降低IPTG的浓度，0.2mM, 0.4mM, 0.6mM, 0.8mM, 情况都差不多，如果使用1mM, 那就会变澄清了。
请教各位大侠，这到底是怎么回事啊？？
备注：我们实验室保存的HB2151 是08年冻存的，直到最近才拿出来使用，有没可能长时间冻存，菌出问题了？

[ Last edited by 1949stone on 2012-8-14 at 18:29 ]
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1楼 2012-08-09 16:16:11
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luckydong1

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by damaomao at 2012-08-11 09:18:49
菌用之前做过纯化吗

有啊，划了线，挑的单菌落
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4楼2012-08-14 15:27:36
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luckydong1

铜虫 (小有名气)
木有人？？？高手们请帮帮忙啊
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-09 17:24:02
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damaomao

禁虫 (正式写手)
★
luckydong1(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
3楼2012-08-11 09:18:49
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woshizhufeng

新虫 (小有名气)
★
luckydong1(金币+1): 谢谢参与
时间长了，会对菌的活性有影响的。以前师兄保存的菌种，前几天做了活化，居然没有长出来的。
赞一下 回复此楼
6楼2012-08-14 17:48:57
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