应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 最近用HB2151表达遇到以下情况，恳请高手指教
51/1返回列表
查看: 2478  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

luckydong1

铜虫 (小有名气)

[交流] 最近用HB2151表达遇到以下情况，恳请高手指教

我最近使用HB2151大肠杆菌表达，遇到了以下狗血情况，急死人了
1. 转化效率极低。我已经重复做感受态几次了，我也做了几年实验，做感受态是非常熟练了，可是每次做好的感受态转化，全部转化子涂了也就只有10-20 个克隆。
2. 挑克隆提质粒，绝大部分的克隆提出的质粒是拷贝很低的。很淡很淡的一条带，都没法酶切鉴定，就能PCR鉴定了，也没有办法测序，浓度实在太低了，运气好的时候可能有一两个克隆提出的质粒是能用的吧。
3. 诱导表达的时候，只要加入IPTG，菌的生长会明显的被抑制，甚至澄清。我尝试的降低IPTG的浓度，0.2mM, 0.4mM, 0.6mM, 0.8mM, 情况都差不多，如果使用1mM, 那就会变澄清了。
请教各位大侠，这到底是怎么回事啊？？
备注：我们实验室保存的HB2151 是08年冻存的，直到最近才拿出来使用，有没可能长时间冻存，菌出问题了？

[ Last edited by 1949stone on 2012-8-14 at 18:29 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-08-09 16:16:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luckydong1

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by damaomao at 2012-08-11 09:18:49
菌用之前做过纯化吗

有啊，划了线，挑的单菌落
赞一下 回复此楼
4楼2012-08-14 15:27:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

luckydong1

铜虫 (小有名气)
木有人？？？高手们请帮帮忙啊
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-09 17:24:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

damaomao

禁虫 (正式写手)
★
luckydong1(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
3楼2012-08-11 09:18:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woshizhufeng

新虫 (小有名气)
★
luckydong1(金币+1): 谢谢参与
时间长了，会对菌的活性有影响的。以前师兄保存的菌种，前几天做了活化，居然没有长出来的。
赞一下 回复此楼
6楼2012-08-14 17:48:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 17:49 by eObJPa4gWmp6
[文学芳草园] 两块石头 +7 阿美_Lml888 2026-09-03 9/450 2026-09-06 17:48 by myrtle
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 6/300 2026-09-06 17:21 by eObJPa4gWmp6
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 9/450 2026-09-06 17:09 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 8/400 2026-09-06 17:09 by eObJPa4gWmp6
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 12:49 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 12:49 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题 +10 瞬息宇宙 2026-09-01 19/950 2026-09-06 11:15 by jiangxuan2004
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 11:09 by eObJPa4gWmp6
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 4/200 2026-09-06 07:20 by E1iiBLMU2XnD
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 CRJ0Aq2FtVH0 2026-09-03 15/750 2026-09-06 05:48 by E1iiBLMU2XnD
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 5/250 2026-09-06 02:19 by E1iiBLMU2XnD
[基金申请] 面上没中，邀请各位路过的虫友分析一下分数 +12 jackleilei 2026-09-03 13/650 2026-09-05 18:10 by fireguard
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗？ +6 瞬息宇宙 2026-08-31 9/450 2026-09-05 13:11 by haizai99
[硕博家园] Ei源刊怎么投 +4 Fengshun9711 2026-09-04 4/200 2026-09-04 19:30 by 研途知予
[硕博家园] 哈尔滨工业大学韩晓军教授课题组招收2027年硕士推免生及博士研究生 +3 灯灯灯灯DDDD 2026-09-03 3/150 2026-09-03 21:22 by 科研皮皮猪
[基金申请] 要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭