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karin

木虫 (小有名气)

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专业: 农业昆虫学

[求助] 大肠杆菌表达蛋白提取总不成功，求助高手指教！

基因克隆后在大肠杆菌中以包涵体形式大量表达，想提取包涵体蛋白。一般用超声方法破碎细胞，再用2M、8M尿素洗涤包涵体后，蛋白就大部分溶解在8M尿素溶液中。但本人先是超声处理，再是加溶菌酶同时超声，结果都不理想，8M尿素溶液中蛋白量很低，大部分蛋白还是在沉淀中。超声时间由短到长也都试了。求高手帮忙啊！

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坚持就是胜利

1楼2012-02-16 14:08:29

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jacky1985310

新虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★
karin: 金币+1, ★有帮助 2012-06-28 08:18:29

如果获得蛋白后想要做pulldown或其他活性检测的话最好不用尿素等变性剂，那样会涉及到复性之后活性是否回复的问题，还是要摸很多条件。
莫不如把精力花在蛋白表达上，争取使其可溶是最好的选择

二楼的建议很专业，早看到这个MBP的建议我就不用自己挣扎那么久才换这个标签了。。。不过全当是练手了

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4楼2012-06-27 19:07:43

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