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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 全质粒PCR引物设计
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lmzxcom1

金虫 (著名写手)

[求助] 全质粒PCR引物设计

在全质粒上引入1个突变点，有经验的筒子们告知一下设计引物过程中有什么注意事项吧
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1楼 2011-12-22 16:43:27
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lmzxcom1

金虫 (著名写手)
顶起啊
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2楼2011-12-22 21:30:49
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+2): 感谢专家回帖！ 2011-12-23 10:09:34
lmzxcom1(金币+5): ★★★很有帮助 谢谢 2011-12-27 18:16:54
突变位点两端最好各有15个碱基左右配对，突变引物要设计一对，互补关系。
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3楼2011-12-22 22:24:02
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c3024034

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+1): 感谢参与交流! 2011-12-23 10:09:46
设计一对互补的引物，在突变点两端各有11-15的碱基。
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4楼2011-12-23 09:36:44
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lmzxcom1

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-12-22 22:24:02:
突变位点两端最好各有15个碱基左右配对，突变引物要设计一对，互补关系。

不互补不行么，我需要同时突变两个位点。如果互补的话，需要PCR两次了
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5楼2011-12-23 09:49:28
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lmzxcom1

金虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by c3024034 at 2011-12-23 09:36:44:
设计一对互补的引物，在突变点两端各有11-15的碱基。

不互补不行么，我需要同时突变两个位点。如果互补的话，需要PCR两次了
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6楼2011-12-23 09:49:46
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wanggl2004

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
采用quicchange的方法，引物设计有个在线网站，http://www.genomics.agilent.com/ ... lQCPD&PageID=15
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思考是行动的种子！
7楼2011-12-23 13:43:01
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c3024034

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

如果你同时突变两个点的话 必须这两个点很近  不然的话你就需要突变两次
要不你就用quicchange的多点突变试剂盒
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8楼2011-12-23 14:18:06
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ALICEzz

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by c3024034 at 2011-12-23 14:18:06
如果你同时突变两个点的话 必须这两个点很近  不然的话你就需要突变两次
要不你就用quicchange的多点突变试剂盒

想问一下  几个碱基以内算是近呢…如果隔开6、7个bp了行不行呢
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9楼2014-07-17 23:29:32
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研究室新生

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by ALICEzz at 2014-07-17 23:29:32
想问一下  几个碱基以内算是近呢…如果隔开6、7个bp了行不行呢...

理论上应该可以。。不过要保证你的3端引物完全匹配比较重要。。。
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人生是一棵不停生长的树。
10楼2014-08-01 12:15:36
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